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- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名:
MPC-83
- 库存:
999
- 供应商:
武汉赛奥斯生物科技有限公司
- 肿瘤类型:
见详情介绍
- 细胞类型:
见详情介绍
- 品系:
见详情介绍
- 组织来源:
见详情介绍
- 相关疾病:
见详情介绍
- 物种来源:
小鼠
- 免疫类型:
见详情介绍
- 细胞形态:
见详情介绍
- 是否是肿瘤细胞:
见详情介绍
- 器官来源:
见详情介绍
- 运输方式:
常温/干冰
- 年限:
见详情介绍
- 生长状态:
见详情介绍
- 规格:
1×10⁶cells
MPC-83小鼠胰腺腺泡细胞
产品编号:CL-137m
细胞特性
含量:>1x106cells;
生长特性:贴壁生长;
细胞形态:上皮细胞样,细梭形交织
规格:T25瓶或者2mL冻存管包装;
用途:仅供科研使用。
细胞运输、保存及注意事项
复苏细胞 |
冻存细胞 |
|
包装 |
充液的T25细胞培养瓶 |
2mL冻存管 |
运输条件 |
常温 |
干冰 |
保存方式 |
75%酒精消毒瓶壁,置于37℃恒温细胞培养箱 |
-80℃冰箱中保存过夜后转入液氮/立即复苏 |
注意事项 |
① 收到细胞后,75%酒精消毒瓶壁,将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们; ② 请在4或5X显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照,10X和20X各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据; ③ 贴壁细胞:细胞在37℃培养箱中放置2-3h,显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况,有些贴壁细胞在运输过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下,可去除培养瓶中灌液培养基(若有未贴壁的细胞需要离心回收,重悬打入到原培养瓶中),加入新配制的完全培养基6-8mL,放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上,可以对细胞进行传代处理。传代过程中,若因运输振动脱落的细胞需要离心回收; ④ 运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1:2传代。 |
|
培养条件
完全培养基 |
RPMI-1640完全培养基:90%RPMI-1640+10%FBS |
培养条件 |
培养温度37℃;气体环境5%CO2+95%空气; |
冻存液 |
50%RPMI-1640+40%FBS+10%DMSO |
细胞复苏、传代、冻存操作
一、细胞复苏:
① 冻存管从液氮或-80℃冰箱中取出放入PE手套中,迅速没入37℃水浴锅,摇晃冻存管加速溶解,以1min内全部溶解为宜;
②在超净台中将溶解好的细胞液加入到装有9mL完全培养基的离心管内,1000-1200rpm离心5min,弃去上清液,用1-2mL完全培养基重悬细胞;
③将细胞悬液加入到含有5-6mL完全培养基的T25瓶中,放入培养箱培养。
二、细胞传代:
①将旧培养液吸除,PBS清洗两遍后,加入1-2mL胰酶(0.25%Trypsin+0.02%EDTA);
②镜下观察消化情况,在细胞边缘缩小,贴壁松动时(可用吸管吸起些许胰酶轻轻吹打细胞层某处,肉眼可见细胞层脱落,即消化完成,否则继续消化),直接吸掉胰酶,加入5-6mL完全培养基,轻轻吹打细胞层,把细胞层吹落,吹散;
③将细胞悬液按1:2比例分到新的T25瓶中,添加适当的完全培养基,把细胞悬液打匀,于培养箱中培养;
④注意培养基pH值变化和细胞密度,定期换液(每周2-3次),待细胞密度达到80%-90%时,重复传代操作或者冻存。
三、细胞冻存:
收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。下面T25瓶为例:
① 细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中,可使用血球计数板计数,来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×106~1×107个活细胞/ml.
② 1000rpm离心3-5min,去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ,按每1ml冻存液含1×106~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中,标注好名称、代数、日期等信息。
③将要冻存的细胞置于程序降温盒中,-80度冰箱中过夜,之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。
注意事项:
①所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
②建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意:冻存管浸没在液氮中会泄漏,并会慢慢充满液氮。解冻时,液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子,从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。
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