A20小鼠B细胞淋巴瘤

A20小鼠B细胞淋巴瘤细胞

产品编号：CL-113m

细胞介绍

A20 [A-20]是一种BALB/c B细胞淋巴瘤细胞系，来源于在一只老年BALB/cAnN小鼠中发现的自发性网状细胞肿瘤,当细胞在 Click 培养基中生长时，表面免疫球蛋白表达很少；然而，当它们在 RPMI 1640 培养基中生长时，它们会表达大量。细胞可以呈递同种异体抗原和蛋白质抗原。检测结果显示，鼠痘病毒（鼠痘）呈阴性,该细胞系可用于免疫学研究。

细胞特性

来源：小鼠B淋巴细胞瘤

形态：淋巴母细胞样，悬浮生长

含量：>1x10⁶cells

规格：T25x1瓶（常温运输）/ 2mL冻存管x2支（干冰运输）

用途：仅供科研使用

培养基及培养冻存条件准备

完全培养基	RPMI-1640培养基，89% 优质胎牛血清，10% β－巯基乙醇，0.05 mM P/S青霉素-链霉素，1% 参考传代比例：3×10^5-5×10^5cells/mL，每2-3天换液一次
培养条件	气相：95%空气，5%二氧化碳；温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
冻存液	90%血清 + 10%DMSO，现用现配

细胞接收注意事项

收货当天发现异常，请在24小时内及时联系客服，逾期视为收货良好!

冻存管形式：收货后及时置于-80℃冰箱保存，若长时间不使用，应过夜转移至液氮。复苏时每管一次用完不得留存；

T25形式：①收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁，将T25瓶置于37℃培养箱放置2-4h（视细胞密度而定）稳定细胞状态，镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100x，200x各一张，观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况），以此做为收货依据；②收到的是T25瓶发货的细胞，抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中（加入按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基）。收到的是15mL离心管发货的细胞，请将15mL离心管内的细胞和上清液1：2分到2个新的T25培养瓶中加入1：1按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基即可。③运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。  收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代。

 

细胞复苏、传代、冻存操作

（一）冻存细胞的复苏

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8mL完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

（二）细胞传代

待细胞密度达到80%~90%时，即可进行传代培养：

悬浮状态下生长的细胞，可以通过向培养瓶中添加完全培养基来维持细胞的生长状态，一般情况下细胞密度维持在1×10^5~1×10^6个/mL（不同细胞对密度要求不同）可以维持细胞的正常生长。如需分瓶可以将细胞悬液收集到离心管中，1000rpm 离心5min，弃去上清，补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8mL按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1：2~1：5的比例进行。

（三）细胞冻存

收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。下面T25瓶为例：

①　细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10^6~1×10^7个活细胞/mL；

②　1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1mL冻存液含1×10^6~1×10^7个活细胞/mL分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息；

③　将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。

注意事项：

①　所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

②　建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意：冻存管浸没在液氮中会泄漏，并会慢慢充满液氮。解冻时，液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子，从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。