产品介绍
胚胎干细胞一直是干细胞研究中的大明星,因为它能分化成各种器官细胞,具有最广泛的发展潜力。从技术角度来说,"全能性"的胚胎干细胞对于治疗性克隆来说是最理想的。然而,由于人类胚胎干细胞研究触及伦理和道德,在很多国家被法律禁止,相关研究也处于进退两难的境地,iPS细胞又称诱导多功能干细胞的出现解决了这个难题。
武汉赛奥斯生物提供的人诱导多能干细胞(iPS)是由人体细胞通过非整合的方法诱导获得。iPS在无饲养层、化学成分明确、并且无动物源成分的iPSMED人多潜能干细胞培养体系中培养,适合临床级的干细胞研究和应用。iPS在iPSMED人多潜能干细胞培养体系中可以长期稳定快速增殖,具有高度近似人ES细胞的克隆形态和基因表达,长期维持正常核型,并在体内外具有三胚层分化潜能。
货号:SC-DRY0102
规格:1×106
储存条件:液氮储存
产品内容:
组份代码 |
产品名称 |
规格 |
数量 |
SC-DRY0102 |
hiPSC-U2 人诱导多能干细胞 |
1×106 |
2支 |
ipsMed-CA012 |
人多潜能干细胞复苏完全培养基 |
10mL |
2瓶 |
细胞信息:
项目 |
内容 |
名称 |
hiPSC-U2人诱导多能干细胞 |
来源 |
37岁男性尿液肾上皮细胞 |
诱导方式 |
仙台 |
规格 |
1×106 |
生长曲线检测结果:
细胞增殖良好,倍增时间为24小时,为快速增长型细胞。
注:对于初次培养hiPS细胞的用户来说,本细胞的培养有一定的难度,请阅读本说明书并按照内容进行复苏、培养。
细胞传代条件:
当满足以下条件之一时需要进行传代:
干细胞汇合度达到80%以上;
干细胞集落过大,中央细胞生长不良;
干细胞集落边缘有开始分化的迹象。
细胞传代比例:
通常初次培养前几代的干细胞需要以较低的比例传代,如1:3;后面可以按照1:4 ~ 1:6的比例传代, 传代的比例由细胞株的生长速率决定。
比较理想的传代时间间隔是3 ~ 6天一次。
细胞传代操作流程:
1.将人多潜能干细胞完全培养基取出并平衡至室温,取出包被好Matrigel的培养皿/瓶,吸去包 被液并加入适量人多潜能干细胞完全培养基,置于37℃恒温CO2细胞培养箱中。 注:初次进行传代操作的客户,建议将其中一个孔加入复苏完全培养基
2.吸走待传代细胞培养皿/瓶中的人多潜能干细胞完全培养基,并且加入无钙镁的PBS溶液洗一 次。
3.加入人多潜能干细胞消化液使之完全覆盖皿/瓶底。
4.37℃恒温CO2细胞培养箱中孵育5 ~ 10分钟,显微镜下观察到大部分克隆边缘开始脱离皿/瓶底,克隆 内部大部分细胞间出现较为明显的间隙,肉眼观察到细胞集落变得不透明且发白,表明细胞消化时间 理想。
5.吸去消化液,即刻加入新鲜的人多潜能干细胞完全培养基,用移液器扇形吹打培养皿/瓶底, 使皿/瓶底贴附的干细胞集落脱落,轻柔缓慢吹吸混匀。
注:吹吸的力度要轻柔,吹打脱落和吹吸混匀的次数总共不超过10次为宜。吹打过度导致大量单细胞出现 是造成细胞分化或死亡的重要原因。
注:如有少量细胞无法从皿底脱落,属于正常现象。如有大量细胞无法从皿底脱落,需延长消化时间。
6. 按照传代比例吸取适量细胞悬液加入已准备好的培养皿/瓶中。
7. 显微镜下观察细胞呈4 ~ 20个细胞大小的团块,水平十字摇匀。于室温放置10 ~ 15分钟。
8. 显微镜下观察到大部分克隆贴在皿底后将细胞置于37℃恒温CO2细胞培养箱培养。
9. 每天换液直至达到可以传代的标准。
细胞冻存
细胞冻存操作流程:
1.将准备冻存的细胞取出,弃去培养皿/瓶中的人多潜能干细胞完全培养基,并且加入无钙镁的 PBS溶液洗一次。
2.加入人多潜能干细胞消化液使之完全覆盖皿/瓶底。
3. 37℃恒温CO2细胞培养箱中孵育5 ~ 10分钟,显微镜下观察到大部分克隆边缘开始脱离皿/瓶底,克隆 内部大部分细胞间出现较为明显的间隙,肉眼观察到细胞集落变得不透明且发白,表明细胞消化时间 理想。
4. 吸去消化液,加入培养基轻柔吹打细胞于皿底呈小团块脱落,吸取细胞悬液加入15 mL离心管 中200 g,离心5分钟,弃上清后用无血清冻存液(ipsMed-CA009)重悬细胞 注:吹吸的力度要轻柔,吹打脱落和吹吸混匀的次数总共不超过10次为宜。吹打过度导致大量单细胞出现 是造成细胞分化或死亡的重要原因。 注:如有少量细胞无法从皿底脱落,属于正常现象。如有大量细胞无法从皿底脱落,需延长消化时间。
5. 按照复苏所需要的量,1~5×106 /mL,每管1mL冻存。
6. 直接转移到-80℃冰箱
7. -80℃过夜后,将冻存细胞转移至液氮保存。
细胞复苏
细胞复苏操作流程:
将人多潜能干细胞复苏完全培养基取出并平衡至室温;取出包被过人多潜能干细胞 铺底工作液的培养皿/瓶,吸去包被液并加入适量人多潜能干细胞复苏完全培养基,置于37℃ 恒温CO2细胞培养箱中。
37℃水浴解冻细胞,小心摇晃使细胞融化至仅剩一小块冰晶,迅速取出并用75%酒精消毒冻存管外表 面,转移至无菌操作台中。
将细胞悬液转移至新的15mL离心管中,缓慢加入4mL 人多潜能干细胞完全培养基,轻柔吹吸2 次混匀。
200g离心5分钟。
弃上清,加入适量人多潜能干细胞复苏完全培养基重悬细胞,轻柔吹吸2次混匀,并接种到准 备好的培养皿中,显微镜下观察细胞呈4 ~ 10个细胞大小的团块。
水平十字摇匀,于室温放置10 ~ 15分钟。显微镜下观察到大部分克隆贴在皿底后,37℃恒温CO2细胞 培养箱中培养24小时。
弃掉人多潜能干细胞复苏完全培养基,加入新鲜的人多潜能干细胞完全培养基继续 培养,每天更换新鲜的人多潜能干细胞完全培养基。