NEST 细胞培养瓶系列

使用指南⸺细胞悬液接种到多层细胞培养瓶：

1. 细胞悬液混匀：按照实验要求的浓度准备细胞，在培养基瓶、培养瓶或其他容器中混匀。建议的工作容积为每层30-50 mL。
2. 用移液管紧贴瓶壁缓慢地将液体加到五层细胞培养瓶中，避免产生泡沫或者气泡（每次加液时移液管内液体可留少许）。 注意事项：10 mL移液管可以伸到培养瓶底部使培养基分散开，而25 mL移液管则只能伸到NEST标志的地方把液体分散开。
3. 把培养瓶有NEST标志那一侧朝向自己，顺时针倾斜45度左右放置一段时间，使瓶中各个隔层的液体达到平衡。
4. 轻缓地将培养瓶水平放置于工作台上，有NEST标志那一面朝上。
5. 前后左右轻轻晃动多层瓶，液体会均匀地分布在五个生长面上。 注意事项：摇晃的动作要轻柔，一方面是防止起泡沫，另一方面是要防止培养基渗漏到下层中。

培养液的移除
1. 抽吸法： ①抽吸的时候，将多层瓶倾斜45度，有NEST标志的一面朝向自己。
②将移液管伸到底部抽吸培养基，直至完全抽吸完。
2. 倾倒法：将有NEST标志的一面朝向自己，逆时针45度倾倒液体。 注意事项：抽吸培养液时建议使用10 mL移液管，才能将培养液吸尽。

细胞的收集
1. 用缓冲液清洗一遍以去除残留的血清，后加入消化液（≥ 5 mL/ 层），混匀。
2. 消化大约2 min（视细胞情况而定），用消化终止液中和消化液。
3. 采用移液管抽吸法或倾倒法将细胞悬液置于离心管等容器中。
4. 用一定量的缓冲液冲洗多层瓶三次，将冲洗液分别置于离心管中， 混匀计数或者传代接种。

细胞培养瓶

使用注意事项:
多层细胞培养瓶须小心操作，避免操作过程中产生气泡，因气泡能在挡板处形成虹吸桥而导致上层培养基流到最下一层