本试剂盒仅供科研使用
葡萄糖脱氢酶（Glucose dehydrogenase，GCDH）试剂盒说明书
（WS2180F 分光法 48 样）
一、产品简介：
GCDH（EC 1.1.1.47）属于氧化还原酶家族，催化 D-葡萄糖和 NAD(P)生成 D-葡萄糖酸和 NAD(P)H，
参与戊糖磷酸途径。GCDH 催化 D-葡萄糖和 NAD 生成 D-葡萄糖酸和 NADH，在 340nm 下测定 NADH 上
升速率，即可反映 GCDH 活性。传统方法是检测 NADH 在 340nm 处的吸光值。由于 NADH 的摩尔消光系
数（
ε）较低，所以这种方法灵敏度低，且严重受到干扰。
本试剂盒提供一种简单，灵敏，快速的测定方法：该酶促过程产生的 NADH 与特异的显色剂反应，产
生在 450nm 处有最大吸收峰的有色物质，通过检测该有色物质在 450nm 的增加速率，进而计算出葡萄糖脱
氢酶活性的大小。
二、试剂盒组成和配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 60mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
液体 40mL×1 瓶
4℃保存
试剂二
粉剂 mg×1 瓶
4℃保存
临用前加入 38mL 试剂一充分溶解，
用不完的试剂仍 4℃保存。
试剂三
液体 2.1ml×EP 管
4℃保存
标准品
粉剂 mg×1 支
-20℃保存
若重新做标曲，则用到该试剂
三、所需的仪器和用品：
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、台式离心机、可调式移液器、研钵
四、葡萄糖脱氢酶（GCDH）活性测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备
① 组织样本：
取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆。12000rpm, 4℃离心 10min，取上
清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可以按照组织质量（
g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例提取。
② 细菌/细胞
先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或细胞加入 1mL
提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复
30 次）；12000rpm, 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例进
行提取。
2、上机检测：
① 可见分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 450nm，蒸馏水调零。
② 试剂放在 37℃水浴 5min；
③ 在 1mL 玻璃比色皿中按照下表依次加入试剂：
试剂名称（μL）
测定管
样本
40
试剂二
720
试剂三
40
混匀，立即 450nm 下读取 A1 值，20min 后读取 A2 值，ΔA=A2-A1。
【注】：若ΔA 过小，可以延长反应时间（如：30min 或更长），重新调整的反应时间值要代入计算公式重本试剂盒仅供科研使用
新计算。
五、结果计算：
1、标准曲线方程：y = 0.0372x + 0.009；x 是 NADH 摩尔质量：nmol，y 是ΔA。
2、按样本蛋白浓度计算
单位定义：每毫克组织蛋白每分钟催化 1 nmolNAD+生成 1nmol NADH 定义为一个酶活力单
位。
GCDH（nmol/min /mg prot）＝[（ΔA-0.009）÷0.0372]÷(V1×Cpr) ÷T=33.6×（ΔA-0.009）÷Cpr
3、按样本鲜重计算
单位定义：每克组织每分钟催化 1 nmolNAD+生成 1nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
GCDH（nmol/min/g 鲜重）＝[（ΔA-0.009）÷0.0372]÷(W ×V1÷V)÷T=33.6×（ΔA-0.009）÷W
4、按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟生成 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
GCDH（nmol/min/104 cell）＝[（ΔA-0.009）÷0.0372]÷(500×V1÷V) ÷T=0.07×（ΔA-0.0009）
V----加入提取液体积，1 mL；
V1----加入样本体积，0.04 mL；
T----反应时间，20 min；
Cpr----样本蛋白质浓度，mg/mL；
W----样本质量，g；
500----细菌或细胞总数，500 万。
附：标准曲线制作过程：
1 制备标准品母液（1nmol/μL）：向标准品 EP 管里面加入 1.41ml 蒸馏水（母液需在两
天内用且-20℃保存）。
2 把母液稀释成六个浓度梯度的标准品：0, 0.2,0.4, 0.6, 0.8, 1. nmol /μL。也可根据实际
样本来调整标准品浓度。
3 依据加样表操作，根据结果即可制作标准曲线。
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文献和实验
