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- WS8280F
- 国内
- 2025年12月04日
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- 详细信息
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
Acetaldehyde Dehydrogenase Kit
- CAS号：
WS8280F
- 保质期：
3个月
- 供应商：
上海瓦兰生物
- 保存条件：
4℃
- 规格：
48T
本试剂盒仅供科研使用
乙醛脱氢酶（acetaldehyde dehydrogenase，ALDH）试剂盒说明书
（货号：WS8280F 分光法 48 样）
一、产品简介：
乙醛脱氢酶（ALDH，EC 1.2.1.10）是醛脱氢酶的一种，广泛存在于各种动物、植物和
微生物体内。主要作用是将乙醛氧化成乙酸，在酒精代谢中起主要作用。
本公司提供一种简单，快速，可靠的定量 ALDH 酶活性的方法。在这个测定中，乙醛
被 ALDH 氧化产生 NADH，然后将无色探针还原成有色产物，在 450nm 处具有强吸光度，
即可得到乙醛脱氢酶（ALDH）酶活性大小。
二、试剂盒的组成和配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 60mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
粉体 mg×1 瓶
4℃保存
临用前离心或甩几下使粉体落入
底部，再加4.2mL蒸馏水溶解备用。
试剂二
液体 2.5mL×1 瓶
4℃保存
试剂三
液体 70mL×1 瓶
4℃保存
试剂四
液体µL×1 支
-20℃保存
临用前取两支新的 EP 管，向其中
一支先加 1.1mL 蒸馏水，再迅速吸
取 0.1mL 的试剂四至蒸馏水中，混
匀备用。（该试剂极易挥发，所以
吸取操作时动作需迅速）
标准品
粉体 mg×1 支
4℃保存
若重新做标曲，则用到该试剂。
三、所需的仪器和用品：
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、可调式移液器、研钵、天平、离心
机、蒸馏水。
四、乙醛脱氢酶（ALDH）酶活测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织样本：
称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆。12000rpm，4℃离心 10min，
取上清置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量（
g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取
② 液体样本：直接检测。若浑浊，离心后取上清检测。
2、上机检测：
① 可见分光光度计预热 30 min 以上，调节波长到 450nm，蒸馏水调零。
② 所有试剂解冻至室温（25℃），依次在 1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）中加入：
试剂名称（µL）
测定管
对照管
样本
80
80
试剂一
40
40
试剂二
25
25
试剂三
615
655
试剂四
40本试剂盒仅供科研使用
2
混匀，30s 时于 450nm 处读取各管吸光值 A1，30min
后读取各管吸光值 A2，△A=（A2-A1）测定﹣（A2-A1）
对照（每个样本需做一个自身对照）。
【注】若△A 值在零附近徘徊，可加大样本量（如：40µL，则试剂三相应减少），或者延
长反应时间 T，则改变后的样本体积 V1 和反应时间 T 需代入计算公式重新计算。
五、结果计算：
1、标准曲线方程：y=0.0364x-0.0069；x 是 NADH 摩尔质量（nmol），y 是△A。
2、按蛋白浓度计算：
酶活定义：每毫克蛋白每分钟催化生成 1nmol NADH 的酶量为 1 个酶活单位。
ALDH 酶活(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0069)÷0.0364]÷(Cpr×V1÷V) ÷T
=11.45×(ΔA+0.0069)÷Cpr
3、按样本质量计算：
酶活定义：每克样品每分钟催化生成 1nmol NADH 的酶量为 1 个酶活单位。
ALDH 酶活(nmol/min/g 鲜重)=[(ΔA+0.0069)÷0.0364] ÷(W×V1÷V) ÷T
=11.45×(ΔA+0.0069)÷W
4、按液体体积计算：
酶活定义：每毫升液体样本每分钟催化生成 1nmol NADH 的酶量为 1 个酶活单位。
ALDH 酶活(nmol/min/mL)=[(ΔA+0.0069)÷0.0364]÷V1÷T
=11.45×(ΔA+0.0069)
V---加入提取液体积，1 mL；
V1---加入样本体积，0.08mL；
T---反应时间，30 min；
W---样本质量，g；
Cpr---样本蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
附：标准曲线制作过程：
1 制备标准品母液（1nmol/μL）：向标准品 EP 管里面加入 1.41mL 蒸馏水（母液需在
两天内用且-20℃保存）。
2 把母液稀释成六个浓度梯度的标准品：0, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5. nmol/μL。也可根据实
际样本来调整标准品浓度。
3 依据对照管加样表操作，根据结果即可制作标准曲线。
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