本试剂盒仅供科研使用
半纤维素酶/木聚糖酶测定试剂盒说明书
（货号：WS9070F 分光法 48 样）
一、产品简介：
半纤维素酶主要检测木聚糖酶活力，可将木聚糖降解成低聚糖和木糖的一组酶的总
称，广泛应用于酿造和饲料工业中。
半纤维素酶在酸性下将木聚糖降解成还原性寡糖和单糖，进一步与 3,5-二硝基水杨酸
发生显色反应，在 540nm 处有特征吸收峰，反应液颜色深浅与酶解产生的还原糖量成
正比，通过测定反应液在 540nm 吸光值增加速率，即可计算该酶活力大小。
二、试剂盒组分与配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
60mL 液体×1 瓶
4℃保存
试剂一
25mL×1 瓶
4℃保存
试剂二
粉体 mg×1 瓶
4℃保存
临用前甩几下使粉体落入底部，
再加 12.5mL 试剂一溶解备用。
试剂三
21mL×1 瓶
-20℃保存
标准品
粉剂×1 支
4℃保存
若重新做标曲，则用到该试剂
三、所需的仪器和用品：
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、低温离心机、恒温水浴锅、可调式移液器。
四、半纤维素酶活性测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织：称取约 0.2g 组织（水分充足的样本可取 1g），加入 1mL 经预冷的 95%乙醇冰浴
匀浆，4℃放置 10min；12000rpm，4℃离心 5min；弃上清，留沉淀，向沉淀中加入经
预冷的 80%乙醇混匀，4℃放置 10min；12000rpm，4℃离心 5min；弃上清，留沉淀。
再向沉淀中加入 1mL 经预冷提取液，涡旋混匀，4℃放置 10min；12000rpm，4℃离心
10min；留上清，弃沉淀。上清液置冰上待测。
② 细菌/培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或细
胞加入 1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间
隔 10s，重复 30 次）；12000rpm，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为 500：1 的比例进行提取。
③ 液体样本：澄清液体直接检测，若浑浊则 12000rpm，4℃，离心 15min，取上清待测。
2、上机检测：
1 可见分光光度计预热 30min，调节波长至 540nm，蒸馏水调零。
② 在 EP 管中依次加入：
试剂名称（
μL）
测定管
对照管
样本
100
100
试剂一
100
100
试剂二
100
40℃孵育60min
试剂二
100
试剂三
200
200
混匀，沸水浴（95-100℃）5min，冷却至室温
蒸馏水
200
200本试剂盒仅供科研使用
2
混匀，取出全部澄清液体至1mL玻璃比色皿（光径1cm）中，于
540nm处读取A，ΔA=A测定-A对照（每个测定管设一个对照管）。
【注】1. 若 A 值大于 1.5，最后一步检测时可进行稀释：如取 350μL 待检液至比色皿中，再加 350μL
蒸馏水，相当于稀释倍数 D 为 2，需带入计算公式参与计算。
2. 若ΔA 小于 0.01，则可增加样本加样体积 V1（如增至 200μL，则试剂一减少为 0μL），
则改变后的 V1 代入公式计算。
五、结果计算：
1、标准曲线方程：y = 1.4174x - 0.0429，x 是标准品摩尔质量（
μmol），y 是△A。
2、按样本蛋白浓度计算：
酶活定义：每毫克蛋白每分钟分解木聚糖产生 1nmol 木糖所需酶量为一个酶活单位。
半纤维素酶活力(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0429)÷1.4174×103]÷(Cpr×V1÷V)÷T×D
=117.6×(ΔA+0.0429)÷Cpr×D
3、按样本重量计算：
酶活定义：每克样本每分钟分解木聚糖产生 1nmol 木糖所需酶量为一个酶活单位。
半纤维素酶活力(nmol/min/g 鲜重)=[(ΔA+0.0429)÷1.4174×103] ÷(W×V1÷V)÷T×D
=117.6×(ΔA+0.0429)÷W×D
4、按细菌/细胞密度计算：
酶活定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟分解木聚糖产生 1nmol 木糖所需酶量为一酶活单
位。
半纤维素酶活力(nmol/min/104 cell)=[(ΔA+0.0429)÷1.4174×103]÷(500×V1÷V)÷T×D
=0.235×(ΔA+0.0429)÷W×D
5、按液体体积计算：
酶活定义：每毫升液体样本每分钟分解木糖产生 1nmol 木糖所需酶量为一个酶活单位。
半纤维素酶活力(nmol/min/mL)=[(ΔA+0.0429)÷1.4174×103] ÷V1÷T×D
=117.6×(ΔA+0.0429)×D
V---提取液体积，1mL； V1---样本体积，0.1mL；
T---反应时间，60min；
W---样本质量，g；
木糖分子量---150.131；
D---稀释倍数，未稀释即为 1；
Cpr---样本蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
附：标准曲线制作过程：
1 制备标准品母液（5mg/mL）：向标准品 EP 管里面加入 1mL 蒸馏水（母液需在两天
内用且-20℃保存）。
2 把母液稀释成六个浓度梯度的标准品：0, 0.2, 0.4,0.6,0.8, 1. mg/mL。
3 100μL 标准品+100μL 试剂一+100μL 蒸馏水+200μL 试剂三，混匀，沸水浴（95-100℃）
5min，冷却至室温，再加 200μL 蒸馏水，混匀后取出全部液体至 1mL 玻璃比色皿（光
径 1cm）中，于 540nm 处读取吸光值 A。根据结果即可制作标准曲线。
文献和实验
技术资料