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- wksubio
- WS2280F
- 国内
- 2025年08月07日
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- 详细信息
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
Fructose-1,6-Diphosphate Aldolase (FBA) Kit
- CAS号：
WS2280F
- 保质期：
3个月
- 供应商：
上海瓦兰生物
- 保存条件：
4℃
- 规格：
48T
本试剂盒仅供科研使用
果糖1,6-二磷酸醛缩酶（Fructose-1,6-bisphosphate aldolase, FBA）
试剂盒说明书
（货号：WS2280F 分光法 48 样）
一、产品简介：
果糖 1, 6-二磷酸醛缩酶(EC 4.1.2.13, FBA)既存在于糖酵解/糖异生途径中又存在于磷
酸戊糖循环途径中，为生物体物质合成代谢提供能量 ATP 和底物，因此果糖 1, 6-二磷酸
醛缩酶对细胞生命活动起到至关重要的作用。
FBA 可催化果糖 1,6-二磷酸生成 3-磷酸甘油醛和磷酸二羟*酮，在酶促复合物的相继
作用下催化 NADH 和磷酸二羟*酮生成 NAD 和α-磷酸甘油，检测 340nm 处 NADH 的
下降速率即可得出 FBA 活性的高低。
二、试剂盒的组成和配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 60mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
液体μL×1 支
-20℃保存 用前甩几下或离心使试剂落入底
部，再加 2.1mL 蒸馏水溶解备用。
试剂二
粉剂 mg×4 支
-20℃保存
用前甩几下或离心使试剂落入底
部，每支加 0.6mL 蒸馏水溶解，用
不完的试剂分装后-20℃保存，禁
止
反复冻融，三天内用完。
试剂三
液体μL×1 支
-20℃保存 用前甩几下或离心使试剂落入底
部，再加 2.2mL 蒸馏水溶解备用。
试剂四
液体 30mL×1 瓶
4℃保存
试剂五
粉剂 mg×1 支
4℃保存
用前甩几下或离心使试剂落入底
部，再加 4.2mL 蒸馏水溶解备用。
三、所需的仪器和用品：
紫外分光光度计、1mL 石英比色皿（光径 1cm）、可调式移液器、天平、震荡仪、低温
离心机、研钵。
四、果糖 1,6-二磷酸醛缩酶（FBA）活性测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织样本：
称 0.1g 组织样本，加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆，于 4℃，12000rpm 离心 10min，
取上清液测定。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量（
g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取
② 细菌/细胞样本：
先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取
液；超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30
次）；4ºC 约 12,000rpm 离心 10min，取上清作为待测样品。
【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（104）：提取液（mL）为 500~1000：1 的比例进行提取。
2、上机检测：本试剂盒仅供科研使用
2
① 酶标仪预热 30min，调节波长至 340nm，设定温度 25℃。
② 所有试剂解冻至室温（25℃）。
③ 在 1mL 石英比色皿（光径 1cm）中依次加入：
试剂名称（μL）
测定管
样本
80
试剂一
40
试剂二
40
试剂三
40
试剂四
520
试剂五
80
轻轻混匀，室温（25℃）下于 340nm 处测定，
1min 时读取 A1，5min 后读取 A2，ΔA=A1-A2。
【注】1.若△A 的值在零附近，可以适当延长反应时间到 15min 后读取 A2，改变后的反应时间
需代入计算公式重新计算。或适当加大样本量，则改变后的加样体积需代入计算公式
重新计算。
2. 若下降趋势不稳定，可以每隔 10S 读取一次吸光值，选取一段线性下降的时间段来参与
计算，相对应的 A 值也代入计算公式重新计算。
3. 若起始值 A1 太大如超过 2（如颜色较深的植物叶片，一般色素较高，则起始值相对
偏高），可以适当减少样本加样量，则改变后的加样体积需代入计算公式重新计算。
或向待测样本中加少许活性炭混匀静置 5min 后 12000rpm, 4℃离心 10min，上清液用于
检测；
4. 若△A 大于 0.6，可减少反应时间时间（如 2min），则改变后的反应时间 T 代入计算公
式重新计算。
五、结果计算：
1、按照样本蛋白浓度计算：
酶活定义：每毫克组织蛋白每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
FBA(nmol/min/mg prot)=[ ΔA÷(ε×d)×V2×109]÷(V1×Cpr)÷T=321.54×ΔA÷Cpr
2、按照样本质量计算：
酶活定义：每克组织每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
FBA(nmol/min/g 鲜重)=[ ΔA÷(ε×d)×V2×109]÷(W×V1÷V)÷T=321.54×ΔA÷W
3、按细胞数量计算：
酶活定义:每 104个细胞每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
FBA(nmol/min/104 cell)=[ ΔA÷(ε×d)×V2×109]÷(500×V1÷V)÷T=0.643××ΔA
ε---NADH 摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；
d---比色皿光径，1cm；
V---加入提取液体积，1mL；
V1---加入样本体积，0.08mL；
V2---反应体系总体积，0.2mL=8×10-4L；
T---反应时间，5 min；
W---样本质量，g
Cpr---样本蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
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果糖-1,6-二磷酸醛缩酶(FBA)试剂盒
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