本试剂盒仅供科研使用
糖原含量测定说明书
(货号:WS1650F 分光法 48 样)
一、产品简介:
糖原是由葡萄糖分子通过糖苷键聚合而成的高分子物质,作为重要的能源物质储存于肝
脏、肌肉和脑等重要器官。糖原的储存或代谢异常可引起多种疾病,因此测定糖原含量的
变化,对研究糖原代谢及相关疾病有着重要的意义。
采用蒽酮法:即利用强碱性提取液提取糖原,浓硫酸是糖原脱水生产糖醛衍生物,糖醛
类与蒽酮作用,在 620nm 处有最大吸收峰,再与相同方法处理的葡萄糖标准液比色定量。
二、试剂盒的组成和配制:
三、所需的仪器和用品:
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、水浴锅、可调式移液器、浓硫酸(不
允许快递)和蒸馏水。
四、糖原含量检测:
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验
样本和试剂浪费!
1、检测液制备:
按照肝脏/肌肉样本质量(
g):提取液体积(mL)为 1:3 的比例加入提取液(如取
0.1g 组织,加 0.3mL 提取液),盖紧管盖(用封口膜封口)95℃水解 20min,室温冷却
后即为糖原水解液。
①肝糖原检测液:在冷却后的糖原水解液 EP 管中加入 0.7mL 蒸馏水混匀总体积约 1mL,
8000rpm 室温离心 5min,取上清液 100μL 至新 EP 管中,再加 900μL 蒸馏水即上清
液稀释 10 倍后作为检测液测定。
②肌糖原检测液:在冷却后的糖原水解液 EP 管中加入 0.7mL 蒸馏水混匀总体积约 1mL,
8000rpm 室温离心 5min,取上清液 200μL 至新 EP 管中,再加 200μL 蒸馏水即上清
液稀释 2 倍后作为检测液测定。
③糖原含量低的组织样本:在冷却后的糖原水解液 EP 管中加入 0.7mL 蒸馏水混匀总体
积约 1mL,8000rpm 室温离心 5min,取上清液作为检测液测定。
2、上机检测:
① 可见分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 620nm,蒸馏水调零。
② 在 EP 管中依次加入:
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 15mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
粉剂 mg×2 瓶
4℃保存
用前每瓶甩几下使粉剂落入底部,再加
15mL 浓硫酸,充分溶解混匀后使用;用
不完的试剂 4℃保存 4-5 天。
标准品
粉剂 mg×1 支
4℃保存
从标准管中称量取出 2mg 至一新 EP 管
中,再加 2mL 蒸馏水溶解即 1mg/mL 的
葡萄糖标准品溶液,再稀释 50 倍即
0.02mg/mL 标准品备用。本试剂盒仅供科研使用
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【注】若 A 测定管值在零附近,可以增加测定管上样量 V 检测液(如增至 60μL),蒸
馏水相应减少,则改变后的 V 检测液代入计算公式计算。
五、结果计算:
糖原含量(mg/g)=(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)×(C 标准×V 标)×D÷(V 检测液÷V×W)÷1.11
=0.0054×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白) ×D÷(V 检测液÷V×W)
V 标---0.3mL;
V 检测液---0.03mL;
W---取样量,g;
V---提取液总体积,1mL;
C 标准---标准品浓度,0.02mg/mL;
D---样本测试前稀释倍数,肝糖原 D 值为 10,肌糖原 D 值为 2;
1.11---是此法测得葡萄糖含量换算为糖原含量的常数。
试剂名称
(
μL)
空白管
(只做一次)
标准管
(只做一次)
测定管
蒸馏水
300
270
标准液
300
检测液
30
试剂一
600
600
600
混匀,置 95℃水浴 5min(盖紧用封口膜封口,防止水分散失),
冷却后转移至 1mL 比色皿中,于 620nm 处读取吸光值 A。