本试剂盒仅供科研使用
ATP-柠檬酸裂解酶（ATP-citrate lyase，ACL）试剂盒说明书
（货号：WS7180F 分光法 48 样）
一、产品简介：
ATP-柠檬酸裂解酶（ACL，EC 4.1.3.8）是糖代谢和脂肪酸生物合成的关键酶，其作用底
物和产物是糖代谢中的关键中间产物，并可作为脂肪酸合成的底物；同时在植物的生长发
育以及提高植物抗逆性方面发挥了重要作用。此外，ACL也是三羧酸循环的关键酶。
ACL在ATP和辅酶A存在的情况下催化柠檬酸裂解为乙酰辅酶A、草酰乙酸、腺苷二磷酸
和磷酸盐。苹果酸脱氢酶进一步催化草酰乙酸和NADH生成苹果酸和NAD+，在340nm测定
NADH减少速率，即可得到ACL酶活性大小。
二、试剂盒组成和配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体60mL×1瓶
4℃保存
试剂一
EP管×1支
-20℃保存
临用前甩几下使试剂落入底部，再
加 1.1mL 蒸馏水溶解，仍-20℃保存。
试剂二
液体30mL×1瓶
4℃保存
试剂三
粉体mg×4支
-20℃保存
临用前甩几下使试剂落入底部，
再加 3.9mL 蒸馏水溶解。用不完的
试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻
融，三天内用完。
三、所需的仪器和用品：
可见分光光度计、1mL 石英比色皿（光径 1cm）、台式离心机、水浴锅、可调式移液
器、研钵、冰和蒸馏水。
四、ATP-柠檬酸裂解酶（ACL）活性测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织样本：
称取约 0.1g 组织（水分充足的果实样本可取 0.5g），加 1mL 提取液，进行冰浴匀浆，
12000rpm，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】：也可按照组织质量（
g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取。
② 细菌/细胞样本：
先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液；
超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；
12000rpm，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 1000~5000：1 的比
例进行提取
③ 液体样品：直接检测。若浑浊，离心后取上清检测。
2、上机检测：
① 可见分光光度计预热 30min 以上，调波长至 340nm，温度设定为 25℃，蒸馏水调零。
② 刚从低温下拿出的试剂二和三在可在 25℃水浴锅中孵育 10min。
③ 在 1mL 石英比色皿中依次加入：
试剂名称（μL）
测定管本试剂盒仅供科研使用
2
样本
40
试剂一
40
试剂二
440
试剂三
280
混匀，室温（25℃）下， 立即在 340nm 处读取吸光值 A1，
10min 后再读取 A2，ΔA=A1-A2。
【注】1. 若ΔA 差值在零附近徘徊，可以延长反应时间 10min 到 30min，则相
应的反应时间 T 则代入计算公式重新计算；
或者加大样本上样量（由 40μL 增加到 80μL 等），相应的改变后的加
样体积即 V1 和反应总体积 V2 需代入计算公式重新计算；
或者由 0.1g 样本取样量增加到 0.2g，加 1mL 的提取液研磨提取。
2. 若下降趋势不稳定，可以每隔 10S 读取一次吸光值，选取一段线
性下降的时间段来参与计算，相对应的 A 值也代入计算公式重新计算。
3. 若起始值 A 太大如超过 2（如颜色较深的植物叶片，一般色素较高，则起始值相
对会偏高），可以适当减少样本加样量，则改变后的加样体积需代入计算公式重
新计算。
或向待测样本中加少许活性炭混匀静置 5min 后 12000rpm, 4℃离心 10min，上清
液用于检测；
五、结果计算：
1、按样本蛋白浓度计算：
酶活定义：25℃条件下，每毫克组织蛋白每分钟消耗 1nmolNADH 定义为一个酶活力单位。
ACL（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V2÷（ε×d）×109]÷(V1×Cpr) ÷T=321.5×ΔA÷Cpr
2、按样本鲜重计算
酶活定义：25℃条件下，每克组织每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
ACL（nmol/min/g 鲜重）＝[ΔA×V2÷（ε×d）×109]÷(W× V1÷V)÷T=321.5×ΔA÷W
3、按细菌/细胞密度计算：
酶活定义：25℃条件下，每 1 万个细胞每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
ACL（nmol/min/104 cell）＝[ΔA×V2÷（ε×d）×109]÷(500×V1÷V)÷T=0.64×ΔA
4、按液体体积计算：
酶活定义：25℃条件下，每毫升液体每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
ACL（nmol/min/mL）＝[ΔA×V2÷（ε×d）×109]÷V1÷T=321.5×ΔA
ε---NADH 摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；
V：加入提取液体积，1 mL；
V1---加入样本体积，0.04 mL；
V2---反应体系总体积，8×10-4 L；
T---反应时间，10min；
d---光径，1cm；
500---细菌或细胞总数，500 万；
W---样本质量，g；
Cpr---样本蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
文献和实验
