本试剂盒仅供科研使用
叶绿体色素含量测定试剂盒说明书
(货号:WS3160W 微板法 96 样)
一、产品简介:
叶绿体中所含色素主要有两大类,叶绿素(包括叶绿素 a 和叶绿素 b)和类胡萝卜素(包
括胡萝卜素和叶黄素),它们与类囊体膜上的蛋白质结合,成为色素蛋白复合体,其含量
多少及其组成决定了植物对不同光的吸收、利用效率,常常作为研究光合生理的重要指标。
根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收,在 649nm 和 665nm 处测定叶绿素提取物的
吸光值,在 470nm 处测定类胡萝卜素;然后利用经验公式计算出样品中叶绿素 a 含量、
叶绿素 b 含量、叶绿素总含量及类胡萝卜素含量。
二、试剂盒组分与配制:
试剂名称
规格
保存要求
试剂一
粉剂×1 瓶
4℃保存
乙醇(自备)
1000mL×1 瓶
4℃保存
抽提 Buffer 配制:(体积比)乙醇:蒸馏水=95:5
三、所需的仪器和用品:
酶标仪、96 孔板、天平、10mL 玻璃试管、锡箔纸、无水乙醇。
四、叶绿体色素含量的测定:
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实
验样本和试剂浪费!
1、样本制备
(1)取新鲜植物叶片或其它绿色组织,去掉中脉。
(
2)称约 0.1g 剪碎,用蒸馏水洗干净,然后加入 1mL 抽提 Buffer,少量试剂一(约 50mg),
叶绿素对光敏感,务必在黑暗或弱光条件下充分研磨(难磨叶片可以添加少量石英砂助
磨),然后转移至 10mL 玻璃试管。
(
3)用抽提 Buffer 冲洗研钵,将所有冲洗液及研钵中所有的绿色物质转入 10mL 玻璃试管,
用抽提 Buffer 补充至 10mL,玻璃试管置于黑暗条件下或者包上锡箔纸浸提 3h,观察试
管底部组织残渣完全变白则提取完全,若组织残渣未完全变白,继续浸提至其完全变白。
2、上机检测
分别取200μL浸提液和200μL抽提Buffer于96孔板,记为测定管和空白管,分别于665nm
和 649nm 和 470nm 处读取吸光值 A,△A 665=(A 测定-A 空白) 665,△A 649=(A 测定-A 空白)
649,△A 470=(A 测定-A 空白) 470。
【注】:若吸光值 A 超过 1,待检测的浸提液用抽提 buffer 稀释,计算公式乘以稀释倍数。
五、结果计算:
叶绿素 a 含量(mg/g 鲜重)=Ca×
W
D
V
1000
叶绿素 b 含量(mg/g 鲜重)=Cb×
W
D
V
1000
叶绿素总含量(mg/g 鲜重)=CT×
W
D
V
1000
类胡萝卜素含量(mg/g 鲜重)=Cc×
W
D
V
1000本试剂盒仅供科研使用
Ca=13.95×△A665–6.88×△A649 (mg/L);
Cb=24.96×△A649–7.32×△A665(mg/L);
CT=6.63×△A665+18.08×△A649(mg/L);
Cc=(1000×△A470-2.05×Ca-114.8×Cb)÷245(mg/L)
=(1000×△A470-2851.304×△A649+811.7385×△A665)÷245 (mg/L);
V---代表提取液体积,10mL;
D---代表稀释倍数,未稀释即为 1;
W---代表样本质量,g。
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