本试剂盒仅供科研使用
肌酸激酶（Creatine Kinase, CK）活性测定说明书
（货号：WS2880W 微板法 96 样）
一、产品简介：
肌酸激酶（CK，EC 2.7.3.2）主要存在于心脏、肌肉及脑等组织中，能可逆地催化
肌酸与 ATP 之间的转磷酰基反应，在能量运转、肌肉收缩和 ATP 再生中有重要作用。
肌酸激酶（CK）催化三磷酸腺苷和肌酸生成磷酸肌酸，后者很快全部水解为磷酸，
但是三磷酸腺苷和生成的二磷酸腺苷仍很稳定；通过定磷试剂来测定磷酸肌酸水解出
的磷酸含量检测 CK 酶活性大小。
二、试剂盒的组成和配制：
【注】：全程操作需无磷环境；试剂配置最好用新枪头和玻璃移液器等，避免磷污染。
三、所需的仪器和用品：
酶标仪、96 孔板、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。
四、肌酸激酶（CK）活性检测：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织样本：称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆。 4℃×12000rpm 离
心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量（
g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取。
② 细菌/细胞样本：
先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或细胞加入 1mL
提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；
12000rpm 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（104）：提取液（mL）为 500~1000：1 的比例进行提取。
③ 液体样本：直接检测；若浑浊，离心后取上清检测。
2、上机检测：
① 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 700nm，所有试剂解冻至室温（25℃）。
② 试剂一和二和三可按照 20:20:210 预先配成混合液（现配现用）；在 EP 管中依次加入：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
提取液 120mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
粉体 mg×1 支
4℃保存
用前甩几下使试剂落入底部，再加
4.2mL 蒸馏水溶解（可超声溶解）。
试剂二
粉体 mg×1 支
-20℃保
存
用前甩几下使试剂落入底部，再加
4.2mL 蒸馏水溶解（可超声溶解）。
试剂三
液体 44mL×1 瓶
4℃保存
试剂四
液体 9mL×1 瓶
4℃保存
试剂五
A:粉体 mg×2 瓶
B:液体 6.5mL×1 瓶
4℃保存
临用前在一瓶试剂 A 中加 3.24mL 的 B
液，再加41.76mL蒸馏水混匀溶解备用。
标准品
粉体 mg×1 支
4℃保存
若重新做标曲，则用到该试剂
试剂名称（
μL）
测定管
对照管
试剂一
20
20
试剂二
20
20本试剂盒仅供科研使用
2
③ 显色反应，在 EP 管中直接加入：
【注】1.若△A 低于 0.01 可增加②歩中样本加样体积 V1(如增至 100μL，则试剂三
相应减少，总反应体系不变)，或延长 37℃ 孵育时间 T（如增至 60min）；
或增加取样质量 W；则改变后的 V1 和 T 和 W 需代入公式计算。
2.若 A 大于 1.2，可用蒸馏水对③歩中上清液稀释，则稀释倍数 D 代入公式计算。
五、结果计算：
1、标准曲线方程：y = 0.4836x - 0.0025，x 是标准品摩尔浓度（
μmol/mL）, y 是△A。
2、按蛋白浓度计算：
定义：每小时每毫克组织蛋白产生 1μmol 磷酸肌酸的量为一个酶活力单位。
酶活力(μmol/h/mg prot)=[(△A+0.0025)÷0.4836×V2] ÷(V1×Cpr)÷T=28.12×(△A+0.0025)÷Cpr
3、按样本鲜重计算：
定义：每小时每克组织产生 1μmol 磷酸肌酸的量为一个酶活力单位。
酶活力(μmol/h/g 鲜重)=[(△A+0.0025)÷0.4836×V2]÷(W×V1÷V)÷T=28.12×(△A+0.0025)÷W
4、按细菌或细胞密度计算：
定义：每小时每 1 万个细菌或细胞产生 1μmol 磷酸肌酸的量为一个酶活力单位。
酶活力(μmol/h /104 cell)=[(△A+0.0025)÷0.4836×V2]÷(500×V1÷V)÷T=0.056×(△A+0.0025)
5、按液体体积计算：
定义：每小时每毫升液体产生 1μmol 磷酸肌酸的量为一个酶活力单位。
酶活力(μmol/h/mL)=[(△A+0.0025)÷0.4836×V2]÷V1÷T=28.12×(△A+0.0025)
V---加入提取液体积，1mL；
V1---加入样本体积，0.05mL ； W---样本鲜重，g；
V2---酶促反应总体积，0.34mL；
T---反应时间，1/2 小时；
500---细菌或细胞总数，500 万；
Cpr---样本蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
附：标准曲线制作过程：
1
制备标准品母液（20μmol/mL）：标准品用 1mL 蒸馏水溶解。（母液需在两天内用）。
2
把母液用蒸馏水稀释成六个浓度标准品：0, 0.4, 0.8, 1.2, 1.6, 2. μmol/mL。也可根据实际样本来调
整标准品浓度。
3
依据③歩中显色反应阶段测定管的加样体系操作，根据结果即可制作标准曲线。
试剂三
210
210
样本
50
37℃ 孵育 30min
试剂四
40
40
样本
50
混匀，8000rpm，4℃离心 5min，上清液待测。
上清液
100
100
试剂五
400
400
混匀，室温静置 10min，若浑浊则可 8000rpm，4℃
或室温离心 5min，取 250μL 澄清液体至 96 孔板中，
于 700nm 下读取各管吸光值，△A=A 测定-A 对照（每
个样本做一个自身对照）。
文献和实验
