本试剂盒仅供科研使用
α-甘露糖苷酶（α-Mannosidase,α-Man）活性测定试剂盒说明书
（货号：WS0270F 分光法 24 样）
一、产品简介 ：
α-甘露糖苷酶（EC 3.2.1.24,α-Man）是参与植物体内 N-聚糖加工的关键酶之一。是植物
细胞壁糖蛋白代谢过程中的关键性糖苷酶，在分生组织的生长、果实的成熟软化、种子的
萌发等生理进程中起重要作用。
α-甘露糖苷酶（
α-Man）催化对硝基*酚-α-D-吡喃甘露糖苷产生对硝基*酚（PNP），
该产物在 405nm 处有特征吸收峰，通过测定 405nm 光吸收增加速率，即可计算α-甘露糖
苷酶活性。
二、试剂盒的组成和配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 30mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
粉剂 mg×1 支
4℃保存
用前甩几下使试剂落入底部，再
加 1.1mL 蒸馏水超声溶解备用。
试剂二
液体 20mL×1 瓶
4℃保存
试剂三
液体 20mL×1 瓶
4℃保存
标准品
粉剂×1 支
4℃保存
若重新做标曲，则用到该试剂。
三、所需的仪器和用品：
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、可调式移液器、低温离心机、天平、
研钵、冰和蒸馏水。
四、α-甘露糖苷酶（
α-Man）活性测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本的制备：
① 组织样本：取约 0.1g 组织（水分充足的样本可取 0.5g），加入 1mL 提取液，进行冰
浴匀浆。12000rpm，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】若增加样本量，可按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为 1：5~10 比例提取。
② 细菌或细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或细
胞，加入 1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声
3s，间隔 10s，重复 30 次）；12000rpm，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】若增加样本量，可按照细菌或细胞数量(104个)：提取液体积(mL)为 500~1000：1 的比例提取。
③ 液体样本：直接检测。若浑浊，离心后取上清检测。
2、上机检测：
① 可见分光光度计预热 30min，调节波长至 405nm，蒸馏水调零。
② 所有试剂解冻至室温（
25℃）在 EP 管中依次加入：
试剂名称（
μL）
测定管
对照管
样本
30
30
试剂一
40
试剂二
300
340
迅速混匀，37℃保温 30min
试剂三
350
350本试剂盒仅供科研使用
2
混匀，5min 后吸取全部澄清液体至 1mL 玻璃比色
皿（光径 1cm）中，立即于 405nm 下读取吸光值 A，
ΔA=A 测定-A 对照（每个测定管需设一个对照管）。
【注】：1. 若ΔA 在零附近，可增加样本加样体积 V1（即加样量增加至 60μL，则试剂二相应减
少），或延长保温时间 T（如：由 30min 延长至 60min 或更长），重新调整的 V1 和 T
需代入计算公式重新计算。
2. 若 A 测定值大于 1.5，可对样本上清液用蒸馏水稀释，则稀释倍数 D 代入公式计算。
五、结果计算：
1、标准曲线方程：y = 0.0158x - 0.0018；x 为标准品摩尔质量（nmol），y 为ΔA。
2、按蛋白浓度计算：
酶活定义：每毫克蛋白每分钟催化产生 1 nmol 对硝基*酚(PNP)为一个酶活单位。
α-甘露糖苷酶活性(nmol/min/mg prot)=(ΔA+0.0018)÷0.0158÷(V1×Cpr)÷T×D
=70.3×(ΔA+0.0018)÷ Cpr×D
3、按样本质量计算：
酶活定义：每克组织每分钟催化产生 1 nmol 对硝基*酚(PNP)为一个酶活单位。
α-甘露糖苷酶活性(nmol/min/g 鲜重)=(ΔA+0.0018)÷0.0158÷(V1÷V×W)÷T×D
=70.3×(ΔA+0.0018)÷W×D
4、按细胞数量计算：
酶活定义：每 104个细胞每分钟催化产生 1 nmol 对硝基*酚(PNP)为一酶活单位。
α-甘露糖苷酶活性(nmol/min/104cell)=(ΔA+0.0018)÷0.0158÷(V1÷V×细胞数量)÷T×D
=70.3×(ΔA+0.0018)÷细胞数量×D
5、按液体体积计算：
酶活定义：每毫升液体每分钟催化产生 1 nmol 对硝基*酚(PNP)为一个酶活单位。
α-甘露糖苷酶活性(nmol/min/mL)=(ΔA+0.0018)÷0.0158÷V1÷T×D=70.3×(ΔA+0.0018)×D
V---加入提取液体积，1mL；
V1---加入反应体系中样本体积，30μL=0.03mL；
W---样本质量，g；
500---细胞或细菌总数，500 万；
T---反应时间，30min；
D---稀释倍数，未稀释即为 1；
Cpr---样本蛋白质浓度，mg/mL，建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒；
附：标准曲线制作过程：
1 制备标准品母液（10μmol/mL）：向标准品 EP 管里面加入 1mL 蒸馏水。
2 把母液稀释成以下浓度梯度的标准品：0, 0.4, 0.8, 1.2, 1.6, 2μmol/mL。也可根据实际
样本来调整标准品浓度。
3 在 EP 管中依次加入：30μL 标准品+340μL 试剂二+350μL 试剂三，混匀转移全部液
体至 1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）中，于 405nm 下读取吸光值，根据结果制作标
准曲线。
文献和实验
