本试剂盒仅供科研使用
原果胶含量试剂盒说明书
(货号:WS3070F 分光法 48 样)
一、产品简介:
果胶是构成细胞初生壁和中胶层的主要成分,主要由原果胶、果胶酸甲酯和果胶酸等
形式广泛分布于植物果实、根茎和叶中。果胶和纤维素以及金属离子等物质相结合形成不
溶于水的原果胶,他的存在使果实显得坚实、脆硬。
本试剂盒先提取得到原果胶,采用咔*比色法测定原果胶含量。原果胶在稀酸中水解
为可溶性果胶,并进一步转化为半乳糖醛酸,在硫酸溶液中与咔*进行缩合反应,生成紫
红色物质,经光谱扫描该物质在 530nm 处有最大吸收峰,颜色深浅与果胶含量成正比,
进而得原果胶含量。
二、试剂盒组成和配制:
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 60 mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
液体 1.5mL×1 支
4℃保存
标准品
粉剂 mg×1 支
4℃保存
若重新做标曲,则用到该试剂
三、所需的仪器和用品:
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、水浴锅、可调式移液器、乙醇、浓硫
酸、研钵。
四、原果胶含量测定:
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验
样本和试剂浪费!
1、样本制备:
1 取 0.1g 组织(烘干且过筛后的粉末组织可取 0.01g),加 1.5mL 的 80%乙醇,研磨匀
浆,85℃水浴 10min(及时补充 80%乙醇至 1mL),取出流水冷却后,8000rpm,25℃
离心 10min,弃上清,留沉淀,
2
向沉淀中加入 1mL 的 80%乙醇,混匀,85℃水浴 10min(及时补充 80%乙醇至 1mL),
取出流水冷却后,8000rpm,25℃离心 10min,弃上清,留沉淀。
③ 再向沉淀中加入 1 mL 蒸馏水,混匀,50℃水浴 30min,流水冷却至室温,8000rpm,25℃
离心 10min,弃上清,留沉淀。
④ 向沉淀中加入 1mL 提取液,混匀,95℃水浴 60min,流水冷却至室温,8000rpm,25℃
离心 10min,取上清液待测。
2、上机检测:
① 分光光度计预热 30min 以上,调节波长为 530nm,蒸馏水调零。
② 可取两个样本做适当梯度的稀释(如 4 倍,即 1 份上清液+3 份蒸馏水),确定
适合本次实验的稀释倍数 D。
③ 在 EP 管中依次加入:
试剂名称
(µL)
测定管
空白管
(仅做一次)
样本
105
蒸馏水
105
浓硫酸
630
630
可用封口膜缠紧,85℃水浴 15min 后,本试剂盒仅供科研使用
2
流水冷却至室温。
试剂一
21
21
混匀,室温(25℃)暗处反应 30min(间隔 10min
混匀一次),全部液体转移至 1mL 玻璃比色皿中,
于 530nm 处读取吸光值 A,△A=A 测定-A 空白。
【注】:1、浓硫酸必须是分析纯级别,且不能长期开口放置,否则影响显色结果。另外浓硫酸具有
强腐蚀性,操作时需特别注意,85℃加热取出后冷却再打开盖子,以防液体飞溅烧伤。
2、显色反应必须在暗处反应,否则颜色很快消失或者变淡,影响吸光值。
3、若 A 测定管值大于 1.8,可用蒸馏水稀释样本即待检测上清液,则稀释倍数 D 需代入公
式计算;或若 A 值再零附近可增加样本取样质量 W。
五、结果计算:
1、标准曲线方程:y = 2.6619x-0.0141;,x 为标准品浓度(mg/mL),y 是△A。
2、原果胶含量(mg /g 重量) =[(ΔA+0.0141) ÷2.6619×V1]÷ (W×V1÷V)×D
=0.37×(ΔA+0.0141)÷W
W---样本重量,g;
V---加入提取液体积,1mL;
V1---加入样本体积,0.105mL;
D---稀释倍数。
附:标准曲线制作过程:
1 制备标准品母液(0.5mg/mL):临用前向标准品中加入 2mL 蒸馏水(现配现用)。
2 把母液用蒸馏水稀释成六个浓度梯度的标准品:0,0.1,0.2,0.3,0.4,0.5. mg/mL。
也可根据实际样本来调整标准品浓度。
3 依据测定管的加样表操作,根据结果即可制作标准曲线。