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亮氨酸脱氢酶(LeuDH)活性测定试剂盒,微板法

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  • ¥1030
  • wksubio
  • WS4440W
  • 国内
  • 2025年12月18日
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    • 英文名

      LeuDH Activity Determination Kit

    • CAS号

      WS4440W

    • 保质期

      3个月

    • 供应商

      上海瓦兰生物

    • 保存条件

      4℃

    • 规格

      96T

    本试剂盒仅供科研使用
    谷胺酰胺合成酶Glutamine synthetaseGS试剂盒说明书
    (货号:WS1040F 分光法 48 样)
    一、产品简介:
    谷胺酰胺合成酶(GSEC 6.3.1.2主要存在于植物中,是生物体内氨同化的关键酶之一,植物吸收
    的无机氮经硝酸还原酶(NR)和亚硝酸还原酶(NIR)还原成 NH4+后,通过谷胺酰胺合成酶(GS)参
    与的 GS/GOGAT 途径才能进行氮素的同化和利用。
    谷胺酰胺合成酶(GS)在 ATP Mg2+存在下,催化铵离子和谷氨酸合成谷氨酰胺;谷氨酰胺进一步
    转化为γ─谷氨酰基异羟肟酸,在酸性条件下形成的络合物在 540nm 处有最大吸收峰,进而得到谷胺酰胺
    合成酶(GS)的酶活性大小。
    二、所需的仪器和用品:
    可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、
    研钵、冰和蒸馏水。
    三、试剂盒的组成和配制:
    试剂名称
    规格
    保存要求
    备注
    提取液
    液体 60mL×1
    4℃保存
    试剂一
    液体 20mL×1
    4℃保存
    临用前 37℃预热 10min,充分溶解
    试剂二
    液体 20mL×1
    4℃保存
    临用前 37℃预热 10min,充分溶解
    试剂三
    粉剂 mg×1
    -20℃保存
    用前甩几下或
    4℃离心使试剂落入试管底部
    ,再
    加入
    14mL 蒸馏水充分溶解待用
    ,仍-20℃保存
    试剂四
    液体 22mL×1
    4℃保存
    【注】粉剂量在 mg 级别,使用前用手甩几次或者进行离心,打开直接加入要求的试剂即可。
    四、谷胺酰胺合成酶(GS)活性测定:
    建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验
    样本和试剂浪费!
    1、样本制备:
    ① 组织样本:
    称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液,进行冰浴匀浆。12000rpm4℃离心 10min,取
    上清,置冰上待测。
    【注】:若增加样本量,可按照组织质量(
    g):提取液体积(mL)15~10 的比例进行提取
    ② 细菌/细胞样本:
    先收集细菌/细胞到离心管内,离心后弃上清;取 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液;
    超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次),
    12000rpm4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
    【注】:若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~10001 的比例提取
    2、 上机检测
    ① 可见分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 540nm,蒸馏水调零。
    ② 在 EP 管中依次加入:
    试剂(
    μL
    测定管
    对照管
    样本
    200
    200
    试剂一
    320
    试剂二
    320
    试剂三
    120
    120]
    本试剂盒仅供科研使用
    2
    混匀,37℃水浴 30min
    试剂四
    200
    200
    混匀,反应 2min8000rpm4℃离心 10min,全部上清液转
    移至 1ml 玻璃比色皿中,于 540nm 处分别读取吸光值 A
    ΔA=A 测定-A 对照(每个测定管须设一个对应的对照管)。
    【注】:若A 值低于 0.01,可增加样本加样体积 V1(如由 200μL 增至 400μL,则试剂一和试剂
    二相应减少 120μL,试剂三相应减少 80μL),保持反应总体积不变。或增加样本取样质
    W(由 0.1g 增加到 0.2g 或更高)。则改变后的 V1 W 需代入公式重新计算。
    五、结果计算:
    1、按样本蛋白浓度计算:
    单位定义:每毫克组织蛋白在每分钟内使 A540 吸光值变化 0.01 定义为一个酶活力单位。
    GS(U/mg prot)=ΔA÷(Cpr×V1)÷0.01÷T=16.7×ΔA÷Cpr
    2、按样本鲜重计算:
    单位定义:每克组织在每分钟内使 A540 吸光值变化 0.01 定义为一个酶活力单位。
    GS(U/g 鲜重)=ΔA÷(W×V1÷V)÷0.01÷T=16.7×ΔA÷W
    3、按细菌或细胞密度计算:
    单位定义:每百万细菌或细胞在每分钟内使 A540 吸光值变化 0.01 定义为一个酶活力单位。
    GS(U/104 cell)=ΔA÷0.01÷(500×V1÷V)÷T=0.033×ΔA
    V----加入提取液体积,1 mL
    V1----加入样本体积,0.2mL
    T----反应时间,30 min
    W----样本质量,g
    500----细胞数量;
    Cpr----样本蛋白质浓度,mg/mL,建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。

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