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山梨醇氧化酶（SOX)测定试剂盒

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  • ￥490
  • wksubio
  • WS2750F
  • 国内
  • 2025年11月23日
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    上海瓦兰生物科技有限公司
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    • 英文名：

      Sorbitol oxidase (SOX) assay kit

    • CAS号：

      WS2750F

    • 保质期：

      3个月

    • 供应商：

      上海瓦兰生物

    • 保存条件：

      4℃

    • 规格：

      24T

    本试剂盒仅供科研使用
    山梨醇氧化酶（SOX）测定试剂盒说明书
    （货号：WS2750F 分光法 24 样）
    一、产品简介：
    山梨醇作为一种运输糖，被卸载到果实中时转化成其他糖类物质，山梨醇氧化酶
    （sorbitol oxidase，SOX）就是山梨醇转化和利用过程中的关键酶之一，该酶与果实的
    品质以及果实中糖类物质的积累密切相关。
    山梨醇氧化酶（SOX）催化山梨醇生成葡萄糖，葡萄糖进一步与 3,5－二硝基水杨酸
    反应，生成棕红色氨基化合物，经光谱扫描在 540nm 有特征光吸收，在一定范围内 540nm
    光吸收增加速率与山梨醇氧化酶（SOX）活性成正比。
    二、试剂盒的组成和配制：
    试剂名称
    规格
    保存要求
    备注
    提取液
    液体 30mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂一
    液体 7mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂二
    粉剂 mg×1 支
    4℃保存
    用前加入 1.5mL 蒸馏水充分溶解
    备用；用不完的试剂 4℃保存;
    试剂三
    液体 10mL×1 瓶
    4℃保存
    标准品
    粉体 mg×1 支
    4℃保存
    若重新做标曲，则用到该试剂
    三、所需的仪器和用品：
    可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、低温离心机、水浴锅、可调式移液器、
    研钵、冰和蒸馏水。
    四、山梨醇氧化酶（SOX）活性测定：
    建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
    样本和试剂浪费！
    1、样本制备：
    称样本 0.1g（水分充足的样本可取 0.5g）于研钵中，加入 1mL 提取液，冰浴匀浆后
    转入离心管中。12000rpm，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
    【注】：若增加样本量，可按照组织质量（
    g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取
    2、上机检测：
    1 可见分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 540nm，蒸馏水调零。
    2 在 EP 管中依次加入：
    试剂名称（μL）
    测定管
    对照管
    样本
    40
    40
    试剂一
    120
    160
    试剂二
    40
    混匀，30℃（水浴锅或恒温培养箱）下孵育 30min
    试剂三
    200
    200
    混匀，沸水浴（95-100℃）（可用封口膜缠紧 EP 管）5min，
    流水冷却
    蒸馏水
    400
    400
    混匀，全部澄清液体转入 1mL 玻璃比色皿中，于 540nm 处读取
    吸光值 A，△A=A 测定-A 对照（每个样本自身需做一个自身对照）。本试剂盒仅供科研使用
    2
    【注】：1.若吸光值大于 2，可减少样本加样量 V1（如减至 20μL，则试剂一相应增加），则改
    变后的加样体积 V1 需代入计算公式重新计算。
    2.若ΔA 值在零附近徘徊，可延长 30℃水浴时间（如增至 60min），则改变后的反应时间 T
    需代入公式重新计算。
    五、结果计算：
    1、标准曲线方程为 y = 0.0104x-0.0496；x 为标准品质量（μg），y 为ΔA。
    2、按蛋白浓度计算：
    单位定义：37℃每毫克蛋白每分钟产生 1μg 葡萄糖定义为一个酶活性单位。
    山梨醇氧化酶（SOX）（μg/min/mg prot）=[(ΔA+0.0496) ÷0.0104]÷(V1×Cpr ) ÷T
    =80.1×(ΔA+0.0496) ÷Cpr
    3、按鲜重计算：
    单位的定义：37℃每克组织每分钟产生 1μg 葡萄糖定义为一个酶活性单位。
    山梨醇氧化酶（SOX）（μg/min/g 鲜重）=[(ΔA+0.0496) ÷0.0104]÷(W×V1÷V) ÷T
    =80.1×(ΔA+0.0496)÷W
    V----加入提取液体积，1mL； V1----加入反应体系中样本体积，0.04mL；
    T----反应时间，30min；
    W----样本鲜重，g；
    Cpr----样本蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒；
    附：标准曲线制作过程：
    1 制备标准品母液（3mg/mL）：向标准品 EP 管里面加入 1mL 蒸馏水（母液需在两天
    内用且-20℃保存）。
    2 把母液稀释成六个浓度梯度的标准品：0, 0.6, 1.2, 1.8, 2.4, 3. mg/mL。也可根据实际
    样本来调整标准品浓度。
    3 按照测定管的加样顺序依次加样操作，根据结果即可制作标准曲线。

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