本试剂盒仅供科研使用
普鲁兰酶活性测定试剂盒说明书
（货号：WS8750F 分光法 48 样）
一、产品简介：
普鲁兰酶是一种水解酶，广泛存在于微生物及动物、植物体内，能专一地分解淀粉和
糖原及其衍生物分枝点的α-1.6-葡萄糖昔键。它的这种特性最早被用于淀粉结构的理论研
究，到七十年代,普鲁兰酶的应用已扩展到淀粉糖浆、啤酒和酒精生产等多个淀粉深加工
领域，并逐步从实验室阶段走向工业化规模。
普鲁兰酶催化普鲁兰分解产生还原糖，进一步与 3,5－二硝基水杨酸反应，生成棕红色
氨基化合物，经光谱扫描在 540nm 有特征光吸收，在一定范围内 540nm 光吸收值与还
原糖生成量成正比。通过光吸收增加速率来计算普鲁兰酶活性大小。
二、试剂盒的组成和配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 60mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
液体 15mL×1 瓶
4℃保存
试剂二
粉剂×1 瓶
4℃保存
用前甩几下使粉剂落入底部，再
加入 12mL 试剂一充分溶解备
用；用不完的试剂 4℃保存;
试剂三
液体 10mL×1 瓶
4℃保存
标准品
粉体 mg×1 支
4℃保存
若重新做标曲，则用到该试剂
三、所需的仪器和用品：
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、低温离心机、水浴锅、可调式移液
器、研钵、冰和蒸馏水。
四、普鲁兰酶活性测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织样本：
称样本 0.1g（水分充足的样本可取 0.5g）于研钵中，加入 1mL 提取液，冰浴匀浆后
转入离心管中。12000rpm，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量（
g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取
② 液体样本：直接测定。若浑浊，离心后取上清检测。
2、上机检测：
1 可见分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 540nm，蒸馏水调零。
② 在 EP 管中依次加入：
试剂名称（
μL）
测定管
对照管
样本
20
20
（95℃煮沸 10min 的酶液）
试剂二
100
100
混匀，50℃孵育 30min
试剂三
100
100
混匀，95℃水浴 10min（用封口膜缠紧，以防止水分散失），
流水冷却至室温。
蒸馏水
500
500
混匀，全部液体转移至 1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）中，于本试剂盒仅供科研使用
2
540nm 处读取吸光值 A，ΔA＝A 测定-A 对照（每个样本做一
个自身对照）。
【注】：1.若 A 测定管的吸光值大于 2，可以用蒸馏水对整个显色混合液用蒸馏水进行稀释（如取
显色混合液 360μL 至 1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）中，再加 360μL 蒸馏水，即稀
释 2 倍），则稀释倍数 D 需代入公式计算。或减少上清液体积 V1（如减至 10μL，则加
10μL 蒸馏水补齐），则 V1 需代入公式重新计算。
2.若ΔA 值在零附近徘徊，可增加样本加样体积 V1（如增至 40μL，则最后蒸馏水体积相
应减少，保持反应总体积不变），或延长 50℃孵育时间 T（如增至 60min），则相应的 V1
和反应时间 T 需代入公式重新计算。
五、结果计算：
1、标准曲线方程为 y = 13.144x - 0.0644；x 为标准品质量（mg），y 为ΔA。
2、按蛋白浓度计算：
单位定义：37℃每毫克蛋白每分钟产生 1μg 还原糖定义为一个酶活性单位。
普鲁兰酶活性（
μg/min /mg prot）=[(ΔA+0.0644)÷13.144×103]÷(V1×Cpr ) ÷T
=126.8×(ΔA+0.0644)÷Cpr
3、按鲜重计算：
单位定义：37℃每克组织每分钟产生 1μg 还原糖定义为一个酶活性单位。
普鲁兰酶活性（
μg/min /g 鲜重）=[(ΔA+0.0644)÷13.144×103]÷(W×V1÷V2) ÷T
=126.8×(ΔA+0.0644)÷W
4、按液体样本计算：
单位定义：37℃每毫升液体样本每分钟产生 1μg 还原糖定义为一个酶活性单位。
普鲁兰酶活性（
μg/min /mL 液体）=[(ΔA+0.0644)÷13.144×103]÷V1 ÷T
=126.8×(ΔA+0.0644)
V---加入提取液体积，1mL；
V1---加入反应体系中样本体积，0.02mL；
T---反应时间，30min；
W---样本鲜重，g；
Cpr---样本蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的蛋白含量(考马斯亮蓝法)试剂盒，不
建议使用蛋白含量(BCA 法) 试剂盒；
附：标准曲线制作过程：
1 制备标准品母液（
5mg/mL）：向标准品 EP 管里面加入 1mL 蒸馏水（母液需在两天
内用且-20℃保存）。
2 把母液稀释成六个浓度梯度的标准品：0, 1, 2, 3, 4, 5. mg/mL。也可根据实际样本来
调整标准品浓度。
3 按照：20μL 标准品+100μL 蒸馏水+100μL 试剂三，95℃水浴 10min，冷却后，再加
500μL 蒸馏水，混匀，全部液体转移至 1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）中，540nm 下
测定，根据结果即可制作标准曲线。
文献和实验
技术资料