本试剂盒仅供科研使用
葡萄糖-6-磷酸酶（G6Pase)活性测定试剂盒说明书
(货号：WS7550F 分光法 48 样)
一、产品简介：
葡萄糖-6-磷酸酶（(glucose 6 phosphatase，G6Pase，EC 3.1.3.9）主要存在于肝脏、肾 脏、
小肠粘膜细胞、胰岛细胞中，催化 6-磷酸葡萄糖水解为葡萄糖的关键酶，该反应是糖原
分解和糖异生的最后一步反应。在保证血糖的动态平衡方面起着重要的作用。
本试剂盒提供一种简单，灵敏，快速的测定方法：G6Pase 催化葡萄糖-6-磷酸生成葡萄
糖，变旋酶和葡萄糖脱氢酶进一步依次催化 NAD+还原生成 NADH，NADH 与一种显色
探针反应生成有色物质，通过检测该有色物质的增加速率即可计算出 G6Pase 酶活性大小。
二、试剂盒组成和配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 60mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
粉剂 mg×1 支
4℃保存
用前甩几下使粉剂落入底部，
再加 1.1mL 蒸馏水充分溶解，
试剂二
粉剂 mg×1 支
-20℃保存
用前甩几下使粉剂落入底部，
再加 1.1mL 蒸馏水充分溶解，
试剂三
液体μL×1 支
-20℃保存
用前甩几下使液体落入底部，
再加 1mL 蒸馏水充分溶解，
试剂四
液体 1mL×1 支
4℃保存
试剂五
液体 34mL×1 瓶
4℃保存
标准品
粉剂 mg×1 支
-20℃保存
若重新做标曲，则用到该试剂
三、所需的仪器和用品：
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、台式离心机、可调式移液器、研钵、
冰和蒸馏水。
四、葡萄糖-6-磷酸酶（G6Pase)活性测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织样本：称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆。12000rpm 4℃离心
15min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量（
g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例提取
② 细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌
或细胞加入 1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 200W，超声 3s，间
隔 10s，重复 30 次）；12000rpm 4℃离心 15min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（104）：提取液（mL）为 500~1000：1 的比例进行提取。
2、上机检测：
① 可见分光光度计预热 30min 以上，设置温度 25℃,调节波长至 450nm，蒸馏水调零。
② 试剂解冻至室温（25℃）；若一次检测样本数较多，可将试剂一和二和三等比例混匀
后再一起加 60μL，其他试剂加样量不变
③ 在 1mL 玻璃比色皿中依次加入：
试剂名称（
μL）
测定管
样本
40
试剂一
20本试剂盒仅供科研使用
2
试剂二
20
试剂三
20
试剂四
20
试剂五
680
混匀，25℃条件下，立即于 450nm 处读取
A1 值，20min 后读取 A2 值，（观察：酶活性
越大，则黄色越明显）。ΔA=A2-A1。
【注】：1.若ΔA 过小，可以延长反应时间（如：60min 或更长）再读取 A2，
或增加样本加样体积 V1（如增至 70μL，则试剂五相应减少），则改
变后的反应时间 T 和加样体积 V1 需代入计算公式重新计算。
2.若样本自身含有较高水平葡萄糖，为了消除样本自身的背景值，需增设一个样本
自身对照，即对照管换成 40μL 的煮沸样本（95-100℃煮沸 10min,室温离心，取上
清液测定），其他不变。ΔA= A2 测定- A2 对照。
五、结果计算：
1、标准曲线：y = 0.03x - 0.0017；x 是 NADH 摩尔质量（nmol），y 是ΔA。
2、按样本蛋白浓度计算：
单位定义：每毫克组织蛋白每分钟催化 1 nmolNAD+生成 1nmol NADH 定义为一个酶活单位。
G6Pase(nmol/min /mg prot)=[(ΔA+0.0017)÷0.03]÷(V1×Cpr)÷T=41.67×(ΔA+0.0017)÷Cpr
3、按样本鲜重计算：
单位定义：每克组织每分钟催化 1 nmolNAD+生成 1nmol NADH 定义为一个酶活单位。
G6Pase(nmol/min/g 鲜重)=[(ΔA+0.0017)÷0.03]÷(W×V1÷V)÷T=41.67×(ΔA+0.0017)÷W
4、按细菌或细胞密度计算：
单位定义：每 1 万个细胞/细胞每分钟催化 1nmolNAD+生成 1nmol NADH 定为一个酶活单位。
G6Pase(nmol/min/104 cell)=[(ΔA+0.0017)÷0.03]÷(500×V1÷V)÷T=0.08×(ΔA+0.0017)
V----加入提取液体积，1 mL；
V1----加入样本体积，0.04mL；
W----样本质量，g。
T----反应时间，20 min；
Cpr----样本蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
附：标准曲线制作过程：
1 制备标准品母液（1nmol/μL）：向标准品 EP 管里面加入 1.41mL 蒸馏水（母液需在
两天内用且-20℃保存）。
2 把母液稀释成六个浓度梯度的标准品：0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1. nmol/μL。也可根据实际
样本来调整标准品浓度。
3 按照 40μL 标准品+20μL 试剂四+680μL 试剂五加样体系操作，根据结果即可制作标
准曲线。
文献和实验
