本试剂盒仅供科研使用
内切-β-1,4-葡聚糖酶/纤维素酶试剂盒说明书
（货号：WS3350W 微板法 96 样）
一、产品简介：
内切-β-1,4-葡聚糖酶（EC3.2.1.4）存在于细菌、真菌和动物体内，是纤维素酶系的组份
之一，这类酶随机水解β-1,4-糖苷键，将无定形长链纤维素分子截短，将其分解成葡萄糖、
纤维二糖、纤维三糖等各种类型的还原糖，在碱性条件下，产生的还原糖能与3,5-二硝基
水杨酸反应生成棕红色物质，该物质在540nm下有最大吸收峰，即可得出内切-β-1,4-葡聚
糖酶的酶活性大小。
二、试剂盒组分与配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 110mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
液体 32mL×1 瓶
4℃保存
试剂二
粉剂×1 瓶
4℃保存
临用前加 16mL 试剂一，80℃水
浴，搅拌至溶解，仍 4℃保存。
试剂三
液体 30mL×1 瓶
4℃保存
标准品
粉体 mg×1 支
4℃保存
若重新做标曲，则用到该试剂
三、所需的仪器和用品：
酶标仪、96 孔板、水浴锅、离心机、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。
四、内切-β-1,4-葡聚糖酶/纤维素酶活性测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织：称取约 0.2g 组织（水分充足的样本可取 1g），加入 1mL 经预冷的 95%乙醇冰浴
匀浆，4℃放置 10min；12000rpm，4℃离心 5min；弃上清，留沉淀，向沉淀中加入经
预冷的 80%乙醇混匀，4℃放置 10min；12000rpm，4℃离心 5min；弃上清，留沉淀。
再向沉淀中加入 1mL 经预冷提取液，涡旋混匀，4℃放置 10min；12000rpm，4℃离心
10min；留上清，弃沉淀。上清液置冰上待测。
② 细菌/培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或细
胞加入 1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间
隔 10s，重复 30 次）；12000rpm，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为 500：1 比例进行提取。
③ 液体样本：若是澄清液体，直接检测，若液体样本浑浊，需 4℃×12000rpm，离心 10min，
取上清液检测。
2、上机检测：
① 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 540nm。
② 所有试剂解冻至室温（25℃），在 EP 管中依次加入：
试剂名称（
μL）
测定管
对照管
样本
50
50
试剂一
150
试剂二
150
37℃孵育 60min
试剂三
150
150本试剂盒仅供科研使用
2
混匀，95℃水浴 5min，取出后用自来水或冰水冷却至室温，
取 200μL 澄清液体于 96 孔板中，在 540nm 处读取吸光值
A，ΔA=A 测定管-A 对照管（每个样本做一个对照管）。
【注】若ΔA 在零附近如低于 0.005，可增加样本取样质量 W 或增加样本加样体积 V1（如增至
80μL，
则试剂三相应减少），则改变后的 W 和 V1 需代入计算公式重新计算。
五、结果计算：
1、标准曲线方程为 y = 0.0132x - 0.0545；x 为标准品质量（
μg），y 为ΔA。
2、按照蛋白浓度计算
单位定义：每毫克组织蛋白每小时催化产生 1μg 还原糖定义为一个酶活力单位。
内切-β-1,4-葡聚糖酶/纤维素酶活力(μg/h/mg prot)=[(ΔA+0.0545)÷0.0132]÷(Cpr×V1) ÷T
=1515.2×(ΔA+0.0545) ÷Cpr
3、按样本鲜重计算
单位定义：每克组织每小时催化产生 1μg 还原糖定义为一个酶活力单位。
内切-β-1,4-葡聚糖酶/纤维素酶活力(μg/h/g 鲜重)=[(ΔA+0.0545)÷0.0132]÷(W×V1÷V) ÷T
=1515.2×(ΔA+0.0545)÷W
4、按细菌/细胞密度计算
单位定义：每 1 万个细菌或细胞每小时催化产生 1μg 还原糖定义为一个酶活力单位。
内切-β-1,4-葡聚糖酶/纤维素酶活力(μg/h/104 cell)=[(ΔA+0.0545)÷0.0132]÷(500×V1÷V) ÷T
=3×(ΔA+0.0545)
5、按液体体积计算
单位定义：每毫升液体每小时催化产生 1μg 还原糖定义为一个酶活力单位。
内切-β-1,4-葡聚糖酶/纤维素酶活力(μg /h/mL)=[(ΔA+0.0545)÷0.0132]÷V1÷T
=1515.2×(ΔA+0.0545)
V---加入提取液体积，1 mL；
V1---加入样本体积，0.05 mL；
T---反应时间，60 min=1 小时；
W---样本质量，g；
500---细菌或细胞总数，500 万；
Cpr---样本蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒；
附：标准曲线制作过程：
1 制备标准品母液（2mg/mL）：从标准品管中称量取出 4mg 至一新 EP 管中，再加 2mL
蒸馏水混匀溶解即 2mg/mL 的葡萄糖（母液需在两天内用且-20℃保存）。
2 把母液用蒸馏水稀释成六个浓度梯度的标准品：0, 0.4, 0.8, 1.2, 1.6, 2. mg/mL。也可
根据实际样本来调整标准品浓度。
3 依据对照管的加样表操作，根据结果即可制作标准曲线。
文献和实验
