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- WS2350W
- 国内
- 2025年09月28日
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- 详细信息
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
N-Acetyl- β- D-glucosaminidase (NAG) Kit
- CAS号：
WS2350W
- 保质期：
3个月
- 供应商：
上海瓦兰生物
- 保存条件：
4℃
- 规格：
48T
本试剂盒仅供科研使用
N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（N-acetyl-β-D-glucosaminidase,NAG）试剂盒说明书
（货号：WS2350W 微板法 48 样）
一、产品简介：
N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG，EC 3.2.1.52）是溶酶体中的一种酸性水解酶，广
泛存在于各种组织、体液和细胞中，该酶活性变化与机体某些病理状态密切相关。
NAG 分解 4-硝基酚-β-N-乙酰氨基葡萄糖生成对-硝基*酚（PNP），在 415nm 处检测
该产物的升高速率，来计算 NAG 活力大小。
二、试剂盒组分与配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 60mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
粉剂 mg×1 支
-20℃保存
临用前甩几下使粉体落入底部，再加
入 4.2mL 蒸馏水，充分溶解备用，用
不完的试剂仍-20℃保存；
试剂二
液体 10mL×1 瓶
4℃保存
试剂三
液体 65mL×1 瓶
4℃保存
标准品
粉剂×1 支
4℃保存
若重新做标曲，则用到该试剂
三、所需的仪器和用品：
酶标仪、96 孔板、台式离心机、水浴锅或恒温培养箱、可调式移液器。
四、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）活性测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本的制备：
① 组织样本：取约 0.1g 组织（水分充足的样本取 0.5g），加入 1mL 提取液，进行冰浴
匀浆。15000rpm， 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本，可以按照组织质量（
g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 提取
② 细菌或细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或细
胞，加入 1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声
3s，间隔 10s，重复 30 次）；15000 rpm 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本，可按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 提取
③ 液体样本：直接检测。若浑浊，离心后取上清检测。
2、上机检测：
① 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 415nm。
② 在 EP 管中依次加入：
试剂名称（
μL）
测定管
对照管
样本
20
20
试剂一
80
蒸馏水
80
试剂二
100
100
迅速混匀，37℃保温 30min
试剂三
600
600
混匀， 取 200μL 至 96 孔板中，415nm 处测定吸光值 A，
ΔA=A 测定-A 对照（每个测定管需设一个对照管）。本试剂盒仅供科研使用
2
【注】：1.若ΔA 在零附近徘徊，可延长 37℃孵育时间 T（如增至 1 小时或更长），或增加加样体积 V1
（如增至 50μL，则试剂二相应减少）或增加取样质量 W（如增至 0.2g）。则改变后的 T 和 V1
和 W 需代入公式重新计算。
2.若 A 测定大于 1.5 或△A 大于 1.5，可缩短 37℃孵育时间 T（如减至 10min 或更短）或减少
加样体积 V1（如减至 10μL，则试剂二相应增加）。则改变后 T 和 V1 需代入公式重新计算。
五、结果计算：
1、标准曲线：y = 0.0126x - 0.0183；x 为标准品质量（nmol），y 为吸光值ΔA 。
2、按样本蛋白浓度计算：
单位定义：每毫克组织蛋白每分钟产生 1nmol 对-硝基*酚（PNP）定义为一个酶活性单位。
NAG 活性(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0183) ÷0.0126]÷(V1×Cpr)÷T=132.3×(ΔA+0.0183) ÷Cpr
3、按样本鲜重计算：
单位定义：每克组织每分钟产生 1nmol 对-硝基*酚（PNP）定义为一个酶活性单位。
NAG 活性(nmol/min/g 鲜重)=[(ΔA+0.0183) ÷0.0126]÷(W×V1÷V)÷T=132.3×(ΔA+0.0183)÷W
4、按细菌或细胞密度计算：
单位定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟产生 1nmol 对-硝基*酚（PNP）定义一个酶活单位。
NAG 活性(nmol/min/104cell)=(ΔA+0.0183) ÷0.0126]÷(500×V1÷V)÷T =0.26×(ΔA+0.0183)
5、按液体体积计算：
单位定义：每毫升样本每分钟产生 1nmol 对-硝基*酚（PNP）定义为一个酶活性单位。
NAG 活性(nmol/min/mL)=[(ΔA+0.0183) ÷0.0126]÷V1÷T=132.3×(ΔA+0.0183)
V----加入提取液体积，1mL；
V1----加入反应体系中样本体积，20μL=0.02mL；
W----样本质量，g；
500----细胞或细菌总数，500 万；
T----反应时间，30min；
PNP 对分子质量----139.11。
Cpr----样本蛋白质浓度，mg/mL，建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒；
附：标准曲线制作过程：
1 制备标准品母液（1mg/mL）：向标准品 EP 管里面加入 1ml 蒸馏水。
2 把母液稀释成以下浓度梯度的标准品：0, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5 mg/mL。也可根据实际
样本来调整标准品浓度。
3 在 EP 管加入：20μL 标准品+180μL 试剂二+600μL 试剂三，混匀，取 200μL 至 96
孔板中，于 415nm 下读取吸光值。
4 根据结果制作标准曲线。
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N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)试剂盒,微板法
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