ADPG焦磷酸化酶/腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶试剂盒,微板法产品图

ADPG焦磷酸化酶/腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶试剂盒,微板法

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  • ￥2530 - 4450
  • wksubio
  • WS6350W
  • 国内
  • 2026年05月28日
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    • 详细信息
    • 文献和实验
    • 技术资料
    • 库存：

      大量

    • 英文名：

      ADPG Pyrophosphatase/Adenosine Diphosphate Glucose Pyrophosphatase Kit

    • CAS号：

      WS6350W

    • 保质期：

      3个月

    • 供应商：

      上海瓦兰生物

    • 保存条件：

      4℃

    • 规格：

      96T/48T

    规格：96T产品价格：￥4450.0
    规格：48T产品价格：￥2530.0
    本试剂盒仅供科研使用
    腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶（ADP-glucose pyrophosphorylase，
    AGP）活性测定试剂盒说明书
    （货号：WS6350W 微板法 96 样）
    一、产品简介：
    ADPG 焦磷酸化酶(AGP，EC 2.7.7.27)是植物淀粉合成过程中起关键性调节作用的酶，
    催化 l-磷酸葡萄糖(G-1-P)与三磷酸腺苷(ATP)反应形成淀粉合成的直接前体腺苷二磷酸葡
    萄糖(ADPG)，在植物中，主要存在于贮藏器官和叶片中。
    AGP 催化的逆向反应生成 G1P，在反应体系中添加的磷酸己糖变位酶和 6-磷酸葡萄糖
    脱氢酶依次催化生成 6-磷酸葡萄糖酸和 NADPH，340nm 下测定 NADPH 增加速率，即可
    计算 AGP 活性。
    二、测试盒组成和配制：
    试剂名称
    规格
    保存要求
    备注
    提取液
    液体120mL×1瓶
    4℃保存
    试剂一
    粉体mg×1支
    -20℃保存
    临用前甩几下使粉体落入底部，再
    加1.1mL蒸馏水溶解，仍-20℃保存。
    试剂二
    粉体mg×1支
    4℃保存
    临用前甩几下使粉体落入底部，再
    加1.1mL蒸馏水溶解。仍4℃保存。
    试剂三
    液体13mL×1瓶
    4℃保存
    试剂四
    粉体mg×1支
    -20℃保存
    临用前甩几下使粉体落入底部，再
    加 2.1mL 蒸馏水溶解，仍-20℃保存。
    【注】：粉剂量在 mg 级别，使用前用手甩几次或者进行离心，打开直接加入要求的试剂即可。
    三、所需的仪器和用品：
    酶标仪、96 孔板、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。
    四、腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶（AGP）活性测定：
    建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
    样本和试剂浪费！
    1、样本制备：
    ① 组织样本：
    称取约 0.1g 组织（水分充足的样本可取 0.2g），加 1mL 提取液，进行冰浴匀浆，
    12000rpm，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
    【注】：也可按照组织质量（
    g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取。
    【注意】 若样本颜色较深（如较深颜色的植物叶片），可引起起始值 A1 值较大如超过 1.5，可在样本
    制备过程中增加除色素步骤：取约 0.1g 组织（水分充足的样本可取 0.5g），加入 80%乙醇冰浴匀浆，
    12000rpm，4℃离心 10min，弃掉色素较深的上清液；以上除色素步骤重复 2 次。最后向离心得到的
    沉淀中加入 1mL 提取液，混匀或再次冰浴匀浆，12000rpm，4℃离心 10min，取上清置冰上待测。
    ② 液体样品：澄清的液体样本直接检测；若浑浊则离心后取上清液检测。
    2、上机检测：
    ① 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 340nm，设定温度为 30℃。
    ② 所有试剂解冻至室温（25℃），在 96 孔板中依次加入：
    试剂名称（
    μL）
    测定管
    样本
    40
    试剂一
    10本试剂盒仅供科研使用
    2
    试剂二
    10
    试剂三
    120
    轻轻混匀，30℃孵育 10min。
    试剂四
    20
    轻轻混匀，反应开始，30℃条件下，30S 在 340nm 处读取
    吸光值 A1，30min 后读取 A2，△A=A2-A1。
    【注】1. 若ΔA 在零附近徘徊，可延长反应时间 T 至 60min 后或更长读取 A2；或加大样本上样量
    V1（如增至 80μL，则试剂三相应减少，保持总体积不变）；或增加样本取样质量 W；
    则改变后的 T 和 V1 以及 W 需代入计算公式重新计算；
    2. 若上升趋势不稳定，可以每隔 10S 读取一次吸光值，选取一段线性上升的时间段来参与
    计算，相对应的 A1 和 A2 值也代入计算公式重新计算。
    3. 若△A 的值大于 0.4，需缩减反应时间 T（如减至 10min 或更短），或减少样本上样量 V1
    （如减至 20μL，则试剂三相应增加，保持总体积不变）；则改变后反应时间 T 和 V1 需
    代入公式重新计算。
    五、结果计算：
    1、按样本蛋白蛋白浓度计算
    酶活定义：每毫克组织蛋白每分钟催化产生 1nmol NADPH 定义为一个酶活性单位。
    AGP(nmol/min /mg prot)=[ΔA÷(ε×d)×V2×109]÷(V1×Cpr) ÷T=53.6×ΔA÷Cpr
    2、按照样本鲜重计算
    酶活定义：每克组织每分钟催化产生 1nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
    AGP(nmol/min /g 鲜重)=[ΔA÷(ε×d)×V2×109]÷(W×V1÷V)÷T=53.6×ΔA÷W
    3、按照液体体积计算：
    酶活定义：每毫升液体每分钟催化产生 1nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
    AGP(nmol/min/mL)=[ΔA÷(ε×d)×V2×109]÷V1÷T =53.6×ΔA
    ε---NADPH 摩尔消光系数，6.22×103 L/mol/cm；
    V---加入提取液体积，1mL；
    V1---加入样本体积，0.04mL；
    V2---反应体系总体积，2×10-4 L；
    d---比色皿光径，0.5cm；
    T---反应时间，30min；
    W---样本质量，g ；
    Cpr---样本蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。

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