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中性转化酶(NI)/细胞质转化酶试剂盒,微板法

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  • ￥1050
  • wksubio
  • WS6150W
  • 国内
  • 2025年12月17日
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    上海瓦兰生物科技有限公司
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    • 英文名：

      Neutral Invertase (NI)/Cytoplasmic Invertase Kit

    • CAS号：

      WS6150W

    • 保质期：

      3个月

    • 供应商：

      上海瓦兰生物

    • 保存条件：

      4℃

    • 规格：

      48T

    本试剂盒仅供科研使用
    中性/碱性转化酶（Neutral invertase, NI）试剂盒说明书
    （货号：WS6150W 微板法 48 样）
    一、产品简介：
    蔗糖酶即蔗糖转化酶（Invertase，E.C.3.2.1.26）在蔗糖代谢中催化蔗糖分解为果糖和葡萄糖，是高等
    植物蔗糖代谢关键酶之一。根据最适 PH 值，蔗糖转化酶分为酸性转化酶（AI）和中性转化酶（NI）两
    种类型，许多报道均将中性转化酶同碱性转化酶看作一种转化酶。NI 的最适 PH 值在 7.0 左右，主要存
    在于细胞质中，负责分解细胞质中蔗糖为果糖和葡萄糖。
    NI 催化蔗糖分解产生还原糖，进一步与 3,5－二硝基水杨酸反应，生成棕红色氨基化合物，经光谱扫
    描在 540nm 有特征光吸收，在一定范围内 540nm 光吸收值与还原糖生成量成正比。通过光吸收增加速
    率来计算 NI 活性
    二、试剂盒的组成和配制：
    试剂名称
    规格
    保存要求
    备注
    提取液
    液体 60mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂一
    液体 30mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂二
    粉剂×1 瓶
    4℃保存
    用前加入 7.5mL 试剂一充分溶
    解备用；用不完的试剂 4℃保存;
    试剂三
    液体 10mL×1 瓶
    4℃保存
    标准品
    粉体 mg×1 支
    4℃保存
    若重新做标曲，则用到该试剂
    三、所需的仪器和用品：
    酶标仪、96 孔板、低温离心机、水浴锅、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。
    四、中性/碱性转化酶（NI）活性测定：
    建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
    样本和试剂浪费！
    1、样本制备：
    称样本 0.1g（水分充足的样本可取 0.5g）于研钵中，加入 1mL 提取液，冰浴匀浆后
    转入离心管中。12000rpm，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
    【注意】 若样本含糖量高，可引起 A 对照值较大如超过 1.6，即检测背景值过高会影响检测，可在样本
    制备过程中增加除糖步骤：取约 0.1g 组织（水分充足的样本可取 0.5g），加入 1mL 经预冷的 95%乙醇
    冰浴匀浆，4℃放置 10min；12000rpm，4℃离心 5min；弃上清，留沉淀，向沉淀中加入经预冷的 80%
    乙醇混匀，4℃放置 5min；12000rpm，4℃离心 5min；弃上清，留沉淀。再向沉淀中加入 1mL 经预冷
    提取液涡旋混匀，4℃放置 10min；12000rpm，4℃离心 10min；留上清，弃沉淀。上清液置冰上待测。
    2、上机检测：
    ① 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 540nm。
    ② 在 EP 管中依次加入：
    试剂名称（
    μL）
    测定管
    对照管
    样本
    40
    40
    试剂一
    100
    200
    试剂二
    100
    混匀，37℃准确水浴 20min 后，95℃水浴 10min（用封口
    膜缠紧，以防止水分散失），流水冷却后充分混匀（以保
    证浓度不变）。
    试剂三
    100
    100
    混匀，95℃水浴 10min（用封口膜缠紧，以防止水分散失），
    流水冷却后充分混匀，吸取 200μL 转移至 96 孔板中，本试剂盒仅供科研使用
    2
    540nm 处读取吸光值 A，ΔA=A 测定-A 对照（每个测定
    管需设一个对照管）。
    【注】：1.若吸光值大于 1.5，可以用蒸馏水稀释样本后测定，计算公式中乘以相应稀释倍数 D。
    2.若ΔA 值在零附近徘徊，可增加样本加样体积 V1（如增至 80μL，则试剂一相应减少），
    或延长 37℃水浴时间（如增至 40min 或更长），则相应的 V1 和 T 需代入公式重新计算。
    五、结果计算：
    1、标准曲线方程为 y = 0.0056x - 0.0153；x 为标准品质量（
    μg），y 为ΔA。
    2、按蛋白浓度计算：
    单位定义：37℃每毫克蛋白每分钟产生 1μg 还原糖定义为一个酶活性单位。
    NI 活性(μg/min/mg prot)=[(ΔA +0.0153)÷0.0056]÷(V1×Cpr)÷T
    =223.2×(ΔA +0.0153 )÷Cpr
    3、按鲜重计算：
    单位定义：37℃每克组织每分钟产生 1μg 还原糖定义为一个酶活性单位。
    NI 活性(μg/min/g 鲜重)=[(ΔA+0.0153)÷0.0056]÷(W×V1÷V2)÷T
    =223.2×(ΔA +0.0153 )÷W
    V---加入提取液体积，1mL；
    V1---加入反应体系中样本体积，0.04mL；
    T---反应时间，20min；
    W---样本鲜重，g；
    Cp---样本蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒；
    附：标准曲线制作过程：
    1 制备标准品母液（
    5mg/mL）：向标准品 EP 管里面加入 1mL 蒸馏水（母液需在两天
    内用且-20℃保存）。
    2 把母液稀释成六个浓度梯度的标准品：0, 1, 2, 3, 4, 5. mg/mL。也可根据实际样本来
    调整标准品浓度。
    3 按照：40μL 标准品+200μL 试剂一+100μL 试剂三，依次加样操作，95℃水浴 10min，
    冷却后，取 200μL 至 96 孔板中，540nm 下测定，根据结果即可制作标准曲线。

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