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淀粉磷酸化酶试剂盒

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  • ¥810
  • wksubio
  • WS0750F
  • 国内
  • 2025年10月30日
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    • 英文名

      Starch phosphorylase reagent kit

    • CAS号

      WS0750F

    • 保质期

      3个月

    • 供应商

      上海瓦兰生物

    • 保存条件

      4℃

    • 规格

      24T

    本试剂盒仅供科研使用
    淀粉磷酸化酶活性测定说明书
    (货号:WS0750F 分光法 24 样)
    一、产品简介:
    淀粉磷酸化酶是植物组织中降解淀粉的关键酶之一, 采用无机磷比色法测定淀粉
    磷酸化酶活性。
    二、所需的仪器和用品:
    可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、
    研钵、冰和蒸馏水。
    三、试剂盒的组成和配制:
    【注】:全程操作需无磷环境;试剂配置最好用新的枪头和玻璃移液器等,也可以用一次性塑料器皿,避
    免磷污染。
    四、淀粉磷酸化酶活性检测:
    建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实
    验样本和试剂浪费!
    1、样本制备:
    称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液,进行冰浴匀浆。 4×12000rpm 离心 10min,取
    上清,置冰上待测。
    【注】:若增加样本量,可按照组织质量(
    g):提取液体积(mL)15~10 的比例进行提取。
    2、上机检测:
    ① 可见分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 700nm,所有试剂解冻至室温(25℃)。
    ② 在 EP 管中依次加入:
    试剂名称
    规格
    保存要求
    备注
    提取液
    提取液 60mL×1
    4℃保存
    试剂一
    粉体 mg×1
    4℃保存
    临用前甩下使粉体落入底部,再加
    12mL 提取液后于 80℃水浴溶解
    试剂二
    粉体 mg×1
    -20℃保存
    临用前甩下使粉体落入底部,再加
    12mL 蒸馏水溶解
    试剂三
    液体 10mL×1
    4℃保存
    试剂四
    A:粉体 mg×1
    B:液体 3mL×1
    4℃保存
    临用前加 2.9mL B 液,再加 37.1mL
    的蒸馏水,混匀溶解备用。
    标准品
    粉体 mg×1
    4℃保存
    若重新做标曲,则用到该试剂
    试剂名称(μL
    测定管
    对照管
    试剂一
    200
    200
    样本
    150
    试剂二
    200
    200
    混匀,37℃孵育 20min
    试剂三
    200
    200
    样本
    150
    混匀,12000rpm4℃离心 5min,上清液待测本试剂盒仅供科研使用
    2
    ③ 显色反应:
    上清液
    150
    150
    试剂四
    600
    600
    混匀,室温静置 3min700nm 下读取各管吸光值,
    A=A 测定-A 对照(每个样本做一个自身对照)。
    五、结果计算:
    1、标准曲线方程:y = 0.8474x - 0.0164x 是标准品摩尔质量(μmol/mL, y 是△A
    2、按蛋白浓度计算:
    定义:每小时每毫克组织蛋白分解 ATP 产生 1μmol 无机磷的量为一个酶活力单位。
    酶活力(μmol/h/mg prot)= [(A+0.0164)÷0.8474×V2] ÷V1×Cpr÷T
    =17.7×(A+0.0164)÷Cpr
    3、按样本鲜重计算:
    定义:每小时每克组织分解 ATP 产生 1μmol 无机磷的量为一个酶活力单位。
    酶活力(μmol/h/g 鲜重)= [(A+0.0164)÷0.8474×V2]÷(W× V1÷V)÷T
    =17.7×(A+0.0164)÷W
    V---加入提取液体积,1mL
    V1---加入样本体积,0.15mL
    V2---酶促反应总体积,0.75mL
    T---反应时间,1/3 小时;
    W---样本鲜重,g
    Cpr---样本蛋白质浓度,mg/mL;建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
    附:标准曲线制作过程:
    1
    制备标准品母液(5μmol/mL):标准品用 10mL 试剂一溶解。(母液需在两天内用)。
    2
    把母液稀释成六个浓度梯度的标准品:0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1. μmol/mL。也可根据实际样本来调整
    标准品浓度。
    3 依据显色反应阶段测定管的加样体系操作,根据结果即可制作标准曲线。

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