- ￥2990
- 晶抗生物
- 国内
- JK-R8959
- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
避光低温保存
- 保质期：
6个月
- 英文名：
中间葡萄球菌PCR试剂盒
- 库存：
大量
- 供应商：
上海晶抗生物工程有限公司
- 规格：
50次
产品及特点：
1. 即开即用，用户只需要提供DNA模板。
2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增中间葡萄球菌，与其他病原没有交叉反应。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料，PCR后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做40μL体系的PCR 50次，但只能用于科研。
规格及成分：
| 编号 | 成分 | 规格 |
| 试剂一 | PCR MagicMix 3.0 | 1 mL（红盖） |
| 试剂二 | 超纯水 | 1 mL（亮黄色） |
| 试剂三 | 中间葡萄球菌 PCR 引物混合液 | 100 μL（白盖） |
| 试剂四 | 中间葡萄球菌 PCR 阳性对照（1×10E8 /μL） | 50 μL（黄盖） |
| 试剂五 | 使用手册 | 1 份 |
低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。
自备试剂：
样品DNA。
中间葡萄球菌PCR试剂盒
使用方法：
一、样品 DNA 的制备：
1. 用自选方法纯化N+2个样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。可以选用本公司柱式病毒 DNAout。
2. 如果有N个样品，则需要做N+2个提取，包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水（取决于试剂盒要求的样品起始量）中加 10μL 中间葡萄球菌 PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液而得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）：
3. 对N+2个样品，在PCR时需要增加一个PCR阳性对照和一个PCR阴性对照，故需要设置N+4个反应。在N+4个PCR管中分别加入下列成分：
| 成份 | N+2 个样品管 | PCR 阴性对照 | PCR阳性对照 |
| PCR Magic Mix 3.0 | 各 20μL | 20μL | 20μL |
| 中间葡萄球菌PCR 引物混合液 | 各2μL | 2μL | 2μL |
| N+2个样品DNA模板 | 各18μL | -- | -- |
| PCR 阴性对照（水） | -- | 18μL | -- |
| PCR 阳性对照（中间葡萄球菌PCR阳性对照1000倍稀释液） | -- | -- | 18μL |
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 预变性 | 95℃ | 5 min |
| PCR 反应35个循环 | 95℃ | 30 sec |
| 55℃ | 30 sec | |
| 72℃ | 40 sec | |
| 延伸 | 72℃ | 7 min |
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在 扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物阳 性对照必须有 551bp 大小的条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实 验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。
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文献和实验培养，按照Kloos等［1］方法再鉴定。 2 结果 2.1 菌种鉴定结果 金黄色葡萄球菌23株，中间型葡萄球菌28株，表皮葡萄球菌19株，溶血葡萄球菌15株，里昂葡萄球菌9株，人葡萄球菌7株，耳葡萄球菌7株，华纳葡萄球菌3株，其余是腐生葡萄球菌和柯氏葡萄球菌7株，共10种。 2.2 玻片法凝固酶重复试验结果 在限时操作的10秒种内，呈阳性反应者，23株金黄色葡萄球菌中有22株，28株中间型葡萄球菌中有25株，阳性反应准确
；4、0.5%甲醛，用PBS配制；5、吸管、滴管、玻片等。 二、方法1、10%葡萄球菌菌悬液的制备CoWan1株葡萄球菌接种于柯氏瓶，37℃培养18-24小时，用PBS洗下菌苔，每分钟2500转速度离心20分钟。沉淀菌用PBS洗两次后，用0.5%甲醛（用PBS配置）在室温中固定3小时。置于80℃水浴中4分钟以破坏菌体的自源性分解酶。再用PBS洗涤2次后配成10%菌悬液；2、致敏葡萄球菌1毫升10%的菌悬液加0.1毫升伤寒O抗血清充分混合放入37℃水浴中30分钟（中间需摇动两次）。取出后经每分钟2500转速度离心
很好地发育，所以培养比较简单，但刚从动物体上分离的，对各种氨基酸和生长因子的要求较高，特别是对烟酸、硫胺素的要求更为明显。在自然界已发现许多介于 S． aureus与 S． albus中间型的种类。葡萄球菌是柯赫（ R． Koch． 1878）、巴斯德（ L． Pasteur， 1880）和奥格斯顿（ A． Og-ston， 1881）从浓液中发现的，但通过纯培养并进行详细研究的是 F． J． Rosenbach（ 1884）。在生理学上显有许多与大肠杆菌 -产气杆菌群（ coli-aerog
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