外周血CD3+T细胞完全培养基

人外周血PBMC的制备及注意事项

人外周血PBMC的制备流程 收集抗凝人外周血，用 1640 无血清培养基或 PBS 按照 1:1 的比例稀释，上下颠倒混匀或者用移液枪吹打混匀。 在 15 mL 离心管中，先加入 3 mL 充分混匀的 Ficoll 液（1.077 g/mL），再沿着管壁缓慢加入2 mL稀释后的血液，血液和 Ficoll 液分层明显为成功。 注：Ficoll 提前半小时从 4℃ 冰箱取出恢复到室温，温度过高会导致分离不明显，温度过低会导致密度过大，同样分离效果不好， 20~25℃ 最佳。。 将样本小心转移

血液中免疫细胞的流式分型

细胞名称的由来。NK 细胞的数量相对于 B 细胞和T细胞来讲非常稀少，但是 NK 细胞具有非常强烈的细胞毒作用（Cytotoxicity），在机体的天然免疫中占据非常重要的地位。 T 细胞主要分泌一些免疫效应分子（如IFN-γ、IL-4、IL-10、IL-17、IL-21等）或者直接对感染或异化的免疫细胞进行杀伤，CD3 是 T 细胞的主要表面标志物；B 细胞是抗体的来源细胞，激活后大量产生抗体的 B 细胞特称为浆细胞，是机体生产抗体的工厂，其常用的表面标志物为 CD19。在流式检测中，我们通常用 CD3

关于原代 T 细胞电转 DNA 条件的优化探索

转染方法。 结果发现：T 细胞的激活对于转染有着极大的影响，使T细胞激活最多三天可很大地提高转染效率。此外，外部电场的强度、电转的细胞数量和 DNA 的初始量都会显著影响转染结果。电穿孔过程中所施加的电压会影响质粒的渗透，并与电转后的活细胞数呈负相关。质粒的浓度越高，转染效率越高，但会降低细胞活性。对于单激活细胞而言，细胞密度的增加会提高电转后的细胞活性。 研究团队评估了两个临床相关因素的影响，分别是在培养基中补充血清和外周血淋巴细胞分离后立即冷冻保存，对于电转效率的影响。研究团队发现，在使用无异源物的培养基