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植物铵态氮试剂盒,微板法

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  • ￥1010
  • wksubio
  • WS0140W
  • 国内
  • 2026年04月24日
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    • 英文名：

      Plant ammonium nitrogen reagent kit

    • CAS号：

      WS0140W

    • 保质期：

      3个月

    • 供应商：

      上海瓦兰生物

    • 保存条件：

      4℃

    • 规格：

      96T

    本试剂盒仅供科研使用
    植物铵态氮含量试剂盒说明书
    （货号：WS0140W 微板法 96 样）
    一、产品简介：
    氮素是构成生物体的一种必需元素，自然界中的氮素循环包括许多转化作用。空气中的氮
    气被固氮微生物及植物与微生物的共生体固定成氨态氮，经过硝化微生物的作用转化成硝态
    氮，后者被植物或微生物同化成有机氮化物，植物组织氨氮含量可反映植物受胁迫的程度。
    α-氨基酸与水合茚三酮溶液一起加热，经氧化脱氨变成相应的α-酮酸，酮酸进一步脱羧变
    成醛，水合茚三酮则被还原，在弱酸环境中，还原型茚三酮，氨和另一分子水合茚三酮反应，
    缩合生成蓝紫色物质，在 570nm 处有特征吸收峰。
    二、测试盒组成和配制：
    [注]：粉剂量在 mg 级别，使用前用手甩几次或者进行离心，打开直接加入要求的试剂即可。
    三、所需的仪器和用品：
    酶标仪、96 孔板、台式离心机、水浴锅、可调式移液枪、研钵、无水乙醇、冰和蒸馏水。
    四、植物铵态氮含量的测定：
    建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
    样本和试剂浪费！
    1、样本制备：
    ① 组织样本：
    称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，进行室温匀浆，12000rpm，4℃离心 10min，上
    清液置冰上待测。
    [注]:也可按照组织质量（
    g）提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取。
    ② 细菌/细胞样本：
    先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液；
    超声波破碎细菌或细胞（冰浴，300W，超声 3s，间隔 7s，总时间 3min）；12000rpm，4℃
    离心 10min，取上清，置冰上待测。
    [注]:若增加样本量，按照细菌/细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例进行提取。
    ③ 液体样本：直接检测；若浑浊，离心后取上清检测。
    2、上机检测：
    ① 酶标仪预热 30 min，调节波长到 570 nm。
    ② 在 EP 管中按照下表依次加入试剂：
    试剂名称
    规格
    保存要求
    备注
    提取液
    液体 110mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂一
    液体 60mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂二
    粉剂×4 瓶
    4℃保存
    临用前加入 1.5mL 无水乙醇，盖紧后充分
    混匀，再加入 13.5mL 试剂一混匀,10 天内
    用完。
    试剂三
    粉剂×3 支
    4℃保存
    用前甩几下或 4℃离心使试剂落入试管底
    部，每支再加 1.5 mL 蒸馏水充分溶解，用
    不完的试剂分装后-20℃保存(可保存一个
    月)，禁止反复冻融，解冻后可 4℃保存并
    一周内使用完。
    标准品
    液体×1 支
    4℃保存
    若重新做标曲，则用到该试剂。本试剂盒仅供科研使用
    2
    试剂名称（
    μL）
    测定管
    空白管（只做一次）
    蒸馏水
    40
    上清液
    40
    试剂二
    560
    560
    试剂三
    40
    40
    混匀，盖紧盖（可用封口膜缠绕，防止水分散失），
    置于沸水浴中 15 min，再冷水迅速冷却，
    95%乙醇
    320
    320
    混匀，取 200μL 澄清液体（若浑浊可 8000rpm 室温离心
    5min）于 96 孔板中，在 570nm 读取吸光值 A，△A=A
    测定- A 空白。
    五、结果计算：
    1、标准曲线方程：y = 0.3963x + 0.006；x 是标准品摩尔浓度(μmol/mL)，y 是ΔA。
    2、按样本质量计算：
    铵态氮含量(μmol/g 鲜重)=[(ΔA-0.006)÷0.3963×V1] ÷(V1÷V×W)
    =2.52×(ΔA-0.006)÷W
    3、按细胞数量计算：
    铵态氮含量(μmol/104 cell)=[(ΔA-0.006) ÷0.3963×V1] ÷(V1÷V×500)
    =2.52×(ΔA-0.006)÷500
    4、按照液体体积计算：
    铵态氮含量(μmol/mL)=[(ΔA-0.006) ÷0.3963×V1]÷V1=2.52×(ΔA-0.006)
    V---样品提取液总体积，1mL；
    V1---加入样本体积，0.04 mL；
    500---细胞数量，百万；
    W---样品质量，g。
    附：标准曲线制作过程：
    1 标准品母液（10μmol/mL）；
    2 把母液用蒸馏水稀释成以下浓度梯度的标准品：0, 0.4, 0.8, 1.2, 1.6, 2.μmol/mL。也可
    根据实际样本来调整标准品浓度。
    3 依据测定管的加样表操作，根据结果即可制作标准曲线。

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