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- WS0140W
- 国内
- 2025年09月19日
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- 详细信息
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
Plant ammonium nitrogen reagent kit
- CAS号：
WS0140W
- 保质期：
3个月
- 供应商：
上海瓦兰生物
- 保存条件：
4℃
- 规格：
96T
本试剂盒仅供科研使用
植物铵态氮含量试剂盒说明书
（货号：WS0140W 微板法 96 样）
一、产品简介：
氮素是构成生物体的一种必需元素，自然界中的氮素循环包括许多转化作用。空气中的氮
气被固氮微生物及植物与微生物的共生体固定成氨态氮，经过硝化微生物的作用转化成硝态
氮，后者被植物或微生物同化成有机氮化物，植物组织氨氮含量可反映植物受胁迫的程度。
α-氨基酸与水合茚三酮溶液一起加热，经氧化脱氨变成相应的α-酮酸，酮酸进一步脱羧变
成醛，水合茚三酮则被还原，在弱酸环境中，还原型茚三酮，氨和另一分子水合茚三酮反应，
缩合生成蓝紫色物质，在 570nm 处有特征吸收峰。
二、测试盒组成和配制：
[注]：粉剂量在 mg 级别，使用前用手甩几次或者进行离心，打开直接加入要求的试剂即可。
三、所需的仪器和用品：
酶标仪、96 孔板、台式离心机、水浴锅、可调式移液枪、研钵、无水乙醇、冰和蒸馏水。
四、植物铵态氮含量的测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织样本：
称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，进行室温匀浆，12000rpm，4℃离心 10min，上
清液置冰上待测。
[注]:也可按照组织质量（
g）提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取。
② 细菌/细胞样本：
先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液；
超声波破碎细菌或细胞（冰浴，300W，超声 3s，间隔 7s，总时间 3min）；12000rpm，4℃
离心 10min，取上清，置冰上待测。
[注]:若增加样本量，按照细菌/细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例进行提取。
③ 液体样本：直接检测；若浑浊，离心后取上清检测。
2、上机检测：
① 酶标仪预热 30 min，调节波长到 570 nm。
② 在 EP 管中按照下表依次加入试剂：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 110mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
液体 60mL×1 瓶
4℃保存
试剂二
粉剂×4 瓶
4℃保存
临用前加入 1.5mL 无水乙醇，盖紧后充分
混匀，再加入 13.5mL 试剂一混匀,10 天内
用完。
试剂三
粉剂×3 支
4℃保存
用前甩几下或 4℃离心使试剂落入试管底
部，每支再加 1.5 mL 蒸馏水充分溶解，用
不完的试剂分装后-20℃保存(可保存一个
月)，禁止反复冻融，解冻后可 4℃保存并
一周内使用完。
标准品
液体×1 支
4℃保存
若重新做标曲，则用到该试剂。本试剂盒仅供科研使用
2
试剂名称（
μL）
测定管
空白管（只做一次）
蒸馏水
40
上清液
40
试剂二
560
560
试剂三
40
40
混匀，盖紧盖（可用封口膜缠绕，防止水分散失），
置于沸水浴中 15 min，再冷水迅速冷却，
95%乙醇
320
320
混匀，取 200μL 澄清液体（若浑浊可 8000rpm 室温离心
5min）于 96 孔板中，在 570nm 读取吸光值 A，△A=A
测定- A 空白。
五、结果计算：
1、标准曲线方程：y = 0.3963x + 0.006；x 是标准品摩尔浓度(μmol/mL)，y 是ΔA。
2、按样本质量计算：
铵态氮含量(μmol/g 鲜重)=[(ΔA-0.006)÷0.3963×V1] ÷(V1÷V×W)
=2.52×(ΔA-0.006)÷W
3、按细胞数量计算：
铵态氮含量(μmol/104 cell)=[(ΔA-0.006) ÷0.3963×V1] ÷(V1÷V×500)
=2.52×(ΔA-0.006)÷500
4、按照液体体积计算：
铵态氮含量(μmol/mL)=[(ΔA-0.006) ÷0.3963×V1]÷V1=2.52×(ΔA-0.006)
V---样品提取液总体积，1mL；
V1---加入样本体积，0.04 mL；
500---细胞数量，百万；
W---样品质量，g。
附：标准曲线制作过程：
1 标准品母液（10μmol/mL）；
2 把母液用蒸馏水稀释成以下浓度梯度的标准品：0, 0.4, 0.8, 1.2, 1.6, 2.μmol/mL。也可
根据实际样本来调整标准品浓度。
3 依据测定管的加样表操作，根据结果即可制作标准曲线。
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植物铵态氮试剂盒,微板法
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