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蛋白含量(SP)试剂盒(考马斯亮蓝法)

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  • ￥100
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  • WS7140F
  • 国内
  • 2026年01月06日
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    • 英文名：

      Protein content (SP) kit (Coomassie brilliant blue method)

    • CAS号：

      WS7140F

    • 保质期：

      3个月

    • 供应商：

      上海瓦兰生物

    • 保存条件：

      4℃

    • 规格：

      48T

    本试剂盒仅供科研使用
    考马斯亮蓝法测蛋白含量试剂盒说明书
    （货号：WS7140F 分光法 48 样）
    一、产品简介：
    在酸性溶液中，考马斯亮蓝 G-250 与蛋白质结合形成蓝色复合物；经光谱扫描，该
    蓝色复合物在 600nm 处有最大吸收峰，在一定的蛋白浓度范围（1-1000μg/mL）内，其
    颜色的深浅与蛋白质的含量成正比。
    二、测试盒组成和配制：
    试剂名称
    规格
    保存要求
    备注
    试剂一
    液体 40mL×1 瓶
    4℃保存
    标准品
    液体 1mL×1 支
    4℃保存
    若重新做标曲，则用到该试剂
    三、所需的仪器和用品：
    可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、离心机、可调式移液器、研钵。
    四、蛋白含量检测：
    建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
    样本和试剂浪费！
    1、样本制备：
    1 组织样本：
    称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液（提取液可选用酶提取缓冲液、蒸馏水、生理盐
    水）冰浴匀浆，12000rpm，4℃离心 10min，取上清，即待测液。
    【注】：依据研究经验，一般需将样本粗提液稀释到适当倍数再进行测定，如 10 倍。实
    验前可以先选 2 个样本测定，摸索确定适合本次实验的稀释倍数。
    2
    细菌或细胞样本：
    先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取
    液；超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30
    次），12000rpm，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
    【注】：依据研究经验，一般需将样本粗提液稀释到适当倍数再进行测定，如 10 倍。实
    验前可以先选 2 个样本测定，摸索确定适合本次实验的稀释倍数。
    3
    液体样本：澄清无色液体样品可以直接测定。若浑浊，离心后取上清检测。
    【注】：依据研究经验，一般需将样本稀释到适当倍数再进行测定，如 10 倍。实验前可
    以先选 2 个样本测定，摸索确定适合本次实验的稀释倍数。
    2、上机检测：
    ① 分光光度计预热 30 min 以上，设定波长为 600nm，蒸馏水调零。
    ② 在 EP 管中依次加入：
    试剂名称（
    μL）
    测定管
    空白管(只做一次)
    待测液
    160
    蒸馏水
    160
    试剂一
    800
    800
    混匀，置于室温（25℃）静置 10min，全部液体转移至 1mL
    玻璃比色皿中，600nm 处测定吸光值 A（5~15min 完成比色），
    △A=A 测定管-A 空白管。
    【注】：1.确保蛋白浓度在 0~100µg/ml 范围内，否则需要做相应稀释，即最好使 A 测定的值低于 1.5；稀
    释倍数 D 带入公式计算。
    2.去污剂、Triton X-100、十二烷基硫酸钠（SDS）和 0.1mol/L 的 NaOH 溶液对该实验会有影响。本试剂盒仅供科研使用
    2
    五、结果计算：
    1、标准曲线：y = 5.8086x + 0.0322；x 是标准品浓度（mg/mL），y 是△A。
    2、蛋白含量(mg/g 鲜重)=[(△A-0.0322)÷5.8086×V1]÷(W×V1÷V)×D
    =0.172×(△A-0.0322)×D÷W
    3、蛋白含量(mg/mL)=[ (△A-0.0322)÷5.8086×V1]÷V1×D=0.172×(△A-0.0322)×D
    V---提取液体积：1mL；
    V1---加入粗提液体积：0.16mL；
    W---样本质量：g；
    D---稀释倍数，未稀释即为 1。
    附：标准曲线制作过程：
    1 标准品母液（0.5mg/mL）。
    2 把母液用蒸馏水稀释成以下浓度梯度的标准品：0, 0.02, 0.04, 0.06, 0.08, 0.1. mg/mL。
    也可根据实际样本来调整标准品浓度。
    3 依据测定管加样表操作，根据结果即可制作标准曲线。

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