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β半乳糖苷酶(βGAL)生化检测试剂盒

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  • ¥360 - 690
  • 帛科
  • BKS2032
  • 国产
  • 2025年07月11日
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      详见说明书

    • 保质期

      6个月

    • 供应商

      帛科

    • 保存条件

      2-8℃冷藏

    • 规格

      50管/24样/100管/48样

    规格:50管/24样产品价格:¥360.0
    规格:100管/48样产品价格:¥690.0
    商品属性:
    产品名称 规格 实验类型 货号
    β半乳糖苷酶(βGAL)生化检测试剂盒 50管/24样、100管/48样 可见分光光度法、微量法 BKS2032
    商品详情:
    β半乳糖苷酶(βGAL)生化检测试剂盒测定意义:                          
    β-GAL(EC 3.2.1.23)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,能够催化β半乳糖苷化合物中β半乳糖苷键水解,此外还具有转半乳糖苷的作用。β-GAL不仅可为植物的快速生长释放储存的能量,还能在正常的多糖代谢、细胞壁组分代谢以及衰老时细胞壁降解过程中催化多糖、糖蛋白以及半乳糖脂末端半乳糖残基的水解,释放自由的半乳糖。
    测定原理:
    β-GAL分解对--β-D-吡喃半乳糖苷生成对-酚,后者在400nm有最大吸收峰,通过测定吸光值升高速率来计算β-GAL活性。
    自备用品:
    可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
    试剂组成和配制 :
    提取液:液体100mL×2瓶,4℃保存。  
    试剂一:液体10mL×1瓶,4℃避光保存。
    试剂二:粉剂×1瓶,-20℃避光保存。临用前加2mL蒸馏水充分溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
    试剂三:粉剂×1支,-20℃避光保存。临用前加1mL蒸馏水充分溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
    试剂四:粉剂×1支,-20℃避光保存。临用前加1 mL蒸馏水充分溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
    试剂五:粉剂×1瓶,-20℃避光保存。临用前加4 mL蒸馏水充分溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

     
    产品细节图片1
    产品细节图片2
    产品细节图片3
     
    酶液提取:
    ①总PGK酶提取:建议称取约0.1g样本,加入1mL提取液,冰浴匀浆后超声破碎(冰浴,200W,破碎3s,间歇7s,总时间1min),然后4℃,500g离心5min,取上清测定。
    ②胞浆和叶绿体PGK酶的分离:按照植物组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g样本,加入1mL提取液),冰浴匀浆后于4℃,500g离心5min,弃沉淀,取上清在4℃,8000g离心10min,取上清用于测定胞浆PGK酶活性,取沉淀加1mL提取液,震荡溶解后超声破碎(冰浴,200W,破碎3s,间歇7s,总时间1min),然后4℃,500g离心5min,取上清测定叶绿体中PGK酶活性。
    建议测定总PGK酶活性,按照步骤①提取粗酶液,若需要分别测定胞浆和叶绿体中的PGK,则按照步骤②提取粗酶液。
    测定操作
    分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长至340nm,蒸馏水调零。
    取微量石英比色皿/96孔板,依次加入100μL试剂一,20μL试剂二,10μL试剂三,10μL试剂四,40μL试剂五,20μL粗酶液,充分混匀,记录340nm处10s的吸光值A1和310s的吸光值A2,△A=A1-A2
    计算公式
    β半乳糖苷酶(βGAL)生化检测试剂盒用微量石英比色皿测定的计算公式如下
    (1)按照样本蛋白浓度计算
    酶活单位定义:每毫克组织蛋白每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
    PGK(nmol/min /mg prot)=ΔA÷(ε×d)×V反总÷(V样×Cpr) ÷T=321.54×ΔA÷Cpr
    (2)按照样本质量计算
    酶活单位定义:每克组织每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
    PGK(nmol/min /g 鲜重)=ΔA÷(ε×d)×V反总÷(W ×V样÷V样总) ÷T=321.54×ΔA÷W
    V反总:反应体系总体积,0.2mL;ε:NADH摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V样:加入样本体积,0.02mL;V样总:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,5 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g
    用96孔板测定的计算公式如下
    (1)按照样本蛋白浓度计算
    酶活单位定义:每毫克组织蛋白每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
    PGK(nmol/min /mg prot)=ΔA÷(ε×d)×V反总÷(V样×Cpr) ÷T=643.08×ΔA÷Cpr
    (2)按照样本质量计算
    酶活单位定义:每克组织每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
    PGK(nmol/min /g 鲜重)=ΔA÷(ε×d)×V反总÷(W ×V样÷V样总) ÷T=643.08×ΔA÷W
    V反总:反应体系总体积,0.2mL;ε:NADH摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光径,0.5cm;V样:加入样本体积,0.02mL;V样总:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,5 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g
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