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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
22
- 英文名:
详见说明书
- 保质期:
6个月
- 供应商:
帛科
- 保存条件:
2-8℃冷藏
- 规格:
50管/24样/100管/48样
| 规格: | 50管/24样 | 产品价格: | ¥360.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 100管/48样 | 产品价格: | ¥690.0 |
| 产品名称 | 规格 | 实验类型 | 货号 |
| β半乳糖苷酶(βGAL)生化检测试剂盒 | 50管/24样、100管/48样 | 可见分光光度法、微量法 | BKS2032 |
| β半乳糖苷酶(βGAL)生化检测试剂盒测定意义: β-GAL(EC 3.2.1.23)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,能够催化β半乳糖苷化合物中β半乳糖苷键水解,此外还具有转半乳糖苷的作用。β-GAL不仅可为植物的快速生长释放储存的能量,还能在正常的多糖代谢、细胞壁组分代谢以及衰老时细胞壁降解过程中催化多糖、糖蛋白以及半乳糖脂末端半乳糖残基的水解,释放自由的半乳糖。 测定原理: β-GAL分解对--β-D-吡喃半乳糖苷生成对-酚,后者在400nm有最大吸收峰,通过测定吸光值升高速率来计算β-GAL活性。 自备用品: 可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。 |
提取液:液体100mL×2瓶,4℃保存。
试剂一:液体10mL×1瓶,4℃避光保存。
试剂二:粉剂×1瓶,-20℃避光保存。临用前加2mL蒸馏水充分溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
试剂三:粉剂×1支,-20℃避光保存。临用前加1mL蒸馏水充分溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
试剂四:粉剂×1支,-20℃避光保存。临用前加1 mL蒸馏水充分溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
试剂五:粉剂×1瓶,-20℃避光保存。临用前加4 mL蒸馏水充分溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
酶液提取:
①总PGK酶提取:建议称取约0.1g样本,加入1mL提取液,冰浴匀浆后超声破碎(冰浴,200W,破碎3s,间歇7s,总时间1min),然后4℃,500g离心5min,取上清测定。
②胞浆和叶绿体PGK酶的分离:按照植物组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g样本,加入1mL提取液),冰浴匀浆后于4℃,500g离心5min,弃沉淀,取上清在4℃,8000g离心10min,取上清用于测定胞浆PGK酶活性,取沉淀加1mL提取液,震荡溶解后超声破碎(冰浴,200W,破碎3s,间歇7s,总时间1min),然后4℃,500g离心5min,取上清测定叶绿体中PGK酶活性。
建议测定总PGK酶活性,按照步骤①提取粗酶液,若需要分别测定胞浆和叶绿体中的PGK,则按照步骤②提取粗酶液。
测定操作
分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长至340nm,蒸馏水调零。
取微量石英比色皿/96孔板,依次加入100μL试剂一,20μL试剂二,10μL试剂三,10μL试剂四,40μL试剂五,20μL粗酶液,充分混匀,记录340nm处10s的吸光值A1和310s的吸光值A2,△A=A1-A2
计算公式
β半乳糖苷酶(βGAL)生化检测试剂盒用微量石英比色皿测定的计算公式如下
(1)按照样本蛋白浓度计算
酶活单位定义:每毫克组织蛋白每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
PGK(nmol/min /mg prot)=ΔA÷(ε×d)×V反总÷(V样×Cpr) ÷T=321.54×ΔA÷Cpr
(2)按照样本质量计算
酶活单位定义:每克组织每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
PGK(nmol/min /g 鲜重)=ΔA÷(ε×d)×V反总÷(W ×V样÷V样总) ÷T=321.54×ΔA÷W
V反总:反应体系总体积,0.2mL;ε:NADH摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V样:加入样本体积,0.02mL;V样总:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,5 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g
用96孔板测定的计算公式如下
(1)按照样本蛋白浓度计算
酶活单位定义:每毫克组织蛋白每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
PGK(nmol/min /mg prot)=ΔA÷(ε×d)×V反总÷(V样×Cpr) ÷T=643.08×ΔA÷Cpr
(2)按照样本质量计算
酶活单位定义:每克组织每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
PGK(nmol/min /g 鲜重)=ΔA÷(ε×d)×V反总÷(W ×V样÷V样总) ÷T=643.08×ΔA÷W
V反总:反应体系总体积,0.2mL;ε:NADH摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光径,0.5cm;V样:加入样本体积,0.02mL;V样总:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,5 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g
公司正在销售的产品:
土壤木质素过氧化物酶(SLiP)测试盒紫外分光光度法50管/24样
土壤脲酶(SUE)测试盒微量法100管/48样
土壤脲酶(SUE)测试盒可见分光光度法50管/24样
土壤漆酶测试盒微量法100管/48样
土壤漆酶测试盒可见分光光度法50管/24样
土壤羟胺还原酶(HR)测试盒微量法100管/48样
β半乳糖苷酶(βGAL)生化检测试剂盒解没食子酸链球菌PCR检测试剂盒Streptococcus gallolyticusPCR
海豚链球菌PCR检测试剂盒Streptococcus iniaePCR
轻型链球菌PCR检测试剂盒Streptococcus mitisPCR
变异链球菌PCR检测试剂盒Streptococcus mutansPCR
口腔链球菌PCR检测试剂盒Streptococcus oralisPCR
唾液链球菌PCR检测试剂盒Streptococcus salivarius PCR
血红链球菌PCR检测试剂盒Streptococcus sanguinis PCR
链球菌属通用PCR检测试剂盒Streptococcus spp.PCR
猪链球菌型PCR检测试剂盒Streptococcus sui2PCR
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文献和实验时间通常为10秒,根据情况也可以测定更长或更短时间,但是同一批样品最好使用相同的测定时间。 为避免由于质粒 转细胞时效率的差异而带来的误差,可以同时转入Renilla荧光素酶的报告基因质粒作为内参,采用双荧光素酶报告基因检测 试剂盒进行检测;也可以同时转入β-半乳糖甘酶报告基因质粒作为内参,然后采用β-半乳糖苷酶报告基因检测试剂盒进行检测。采用荧光素酶报告基因检测试剂盒中的报告基因 细胞 裂解液裂解获得的样品,可以直接用于β-半乳糖苷酶报告基因 检测试剂盒中的测定。
两个酶:促使乳糖进入细菌的乳糖透过酶(lactose permease)催化乳糖分解第一步的β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)(图19-2)。 在环境中没有乳糖或其他β-半乳糖苷时,大肠杆菌合成β-半乳糖苷酶量极少,加入乳糖2-3分钟后,细菌大量合成β-半乳糖苷酶,其量可提高千倍以上,在以乳糖作为唯一碳源时,菌体内的β-半乳糖苷酶量可占到细菌总蛋白量的3%。在上述二阶段生长细菌利用乳糖再次繁殖前,也能测出细菌中β-半乳糖苷酶活性显著增高的过程。这种典型的诱导现象,是研究
1 应用说明 编码β-半乳糖苷酶(Gal)的基因已商业化地运用到报告基因研究的各种层面,重组的β-Gal已得到成熟的运用,以此用来研究启动子的功能、组织特异性表达、发育调控、mRNA的稳定性以及各种细胞器靶向蛋白的信号序列。应用β-Gal来测定启动子和基因的活性具有双重优点;检测方法简单,用于酶活性分析的底物容易获得,使用TBS-380微型荧光计对溶液中β-Gal活性进行
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