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中性粒细胞提取
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XSL
一、实验所需材料:
1、中性粒细胞分离液(histopaque)
2、全血
3、Hanks液
4、离心管若干
5、离心机
6、移液管,移液抢
二、实验步骤
1. 将所有试剂放至室温。
2、用离心管收集全血1-2ml
3、加等体积的Hanks液至全血中组成
4、加2ml中性粒细胞分离液至装至离心管中。
5、将全血和Hanks液加入分离液中
6、4℃,900r/min离心8-10min血液此时应该分为6层:血浆、单核细胞层、分离液、中性粒细胞、其余的分离液、红细胞 沉淀层。如果分层不是很明显,会导致分离的细胞不纯,则需要重复分离。
7、用吸管小心地移去上面的三层(血浆、单核细胞和分离液)
8、小心地吸取中性粒细胞层和其下面的分离液层,转移至一个干净的离心管中。
9、加Hanks液3ml,后4℃,900r/min离心8-10min,弃上清,留沉淀,重复2次。
10、如果细胞用来提RNA,可加Trizol 1ml保存。
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文献和实验Purpose Materials10ml 6% dextran + 7ml citrate/citric acidDextran: T500 --> 6g+100ml PBSCitrate solution: 25g Na Citrate + 8g citric acid + 500 ml PBS 43 ml blood 12 ml RT Histopaque 107718 ml cold H2 O2 ml 10x PBSM199 for HUVECs: 1L powder pocket
1、质粒的概念 质粒(Plasmid)是一种存在于细菌、酵母等微生物细胞中的小型环状双链 DNA 分子,能够独立于宿主染色体进行自我复制,并通常携带对宿主生存非必需但具有特定功能的基因(如抗生素抗性基因)。质粒是分子生物学和基因工程中最重要的工具之一。 质粒根据其用途可以分为多种不同的类型,如用于保存序列信息的克隆质粒(如:pUC 系列质粒),用于表达蛋白的质粒(如哺乳动物细胞表达所用的 pcDNA3.1 系列质粒),用于基因编辑的质粒(如哺乳动物细胞基因编辑所用的 espCas9-2A
1.生物磁珠具有小尺寸效应和表面效应,能够用高效DNA提取,满足微量生物样本DNA提取的要求。 2.磁珠表面能够进行化学修饰,从而与DNA进行特异性吸附,去除样品DNA溶液中的抑制物质,如:有机溶剂、去污剂、金属离子、燃料等。 3.生物磁珠表面功能团数量可以控制获得可提取DNA溶液的浓度信息,实现定量的要求。 4.生物磁珠可以通过特殊的合成工艺使其具有超顺磁特性,因此,能够通过仪器进行自动化操作,满足数据库建设对大批量样本提取的需要,减少人为因素。 5.用时少,操作
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