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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
1
- 供应商:
威奥生物
- 检测范围:
详见说明书
- 检测方法:
夹心法
- 应用:
科研
- 适应物种:
人
- 标记物:
详见说明书
- 样本:
血清/ 血浆/ 细胞培养上清/组织匀浆/其它生物体液
- 规格:
48T/96T
| 规格: | 48T | 产品价格: | ¥1250.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 96T | 产品价格: | ¥1750.0 |
品质高:凭借多年的生物试剂盒研发经验,提供高灵敏度、高特异性的ELISA检测试剂盒; 技术精:技术服务人员拥有丰富的操作经验和精湛的技术,严格操作,保证高效、精准地完成检测; 服务全:根据客户实验要求设计、制定实验方案,同时为客户提供专业的数据分析服务; 价格低:以优惠的价格为客户提供最全面的服务,
检测原理:
威奥生物生产的ELISA 试剂盒采用“夹心法”:将捕获抗体包被于酶标板上,捕获样品及标准品中的靶蛋白,生物素化的检测抗体与靶蛋白结合, SABC 复合物与生物素化检测抗体结合,形成免疫复合物,加入 TMB显色液后,若反应孔中有靶蛋白则显蓝色,加入终止液变黄色,检测过程中游离的成分均被洗去,用酶标仪在 450 nm 处测OD 值,靶蛋白浓度与OD 值之间呈正比,通过绘制标准曲线计算出标本中靶蛋白的浓度。试剂盒组分: (保存温度 4℃)
| 名 称 | 规格(48 T) | 规格(96 T) |
| 预包被酶标板 | 8×6 条 | 8×12 条 |
| 标准品 | 1 支 | 1 支 |
| 标准品/样品稀释液 | 10ml | 15ml |
| 生物素化检测抗体(100×) | 1 支 | 1 支 |
| 生物素化检测抗体稀释液 | 6ml | 12ml |
| SABC 复合物 | 6ml | 12ml |
| TMB 显色液(A/B) | 各 3ml | 各 6ml |
| 终止液 | 6ml | 12ml |
| 20×浓缩洗涤液 | 30ml | 60ml |
| 封板胶纸 | 2 张 | 4 张 |
| 产品说明书 | 1 份 | 1 份 |
标本收集与试剂准备:
- 血清、血浆样本收集应使用一次性的无热原,无内毒素试管(EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝均可),血清、血浆避免使用溶血,高血脂标本,标本悬浮物应离心去除,使标本清澈透明。待测样本应尽早检测,2-8℃保存 48 小时;更长时间须冷冻(-20℃或-80℃)保存,避免反复冻融。
- 洗涤液配置:用蒸馏水 1:20 稀释(例:1ml 浓缩洗涤液加入 19ml 的蒸馏水)
- 标准品配制:取 8 个 1.5ml 离心管,分别标注 S1,S2,S3,S4,S5,S6,S7,blank,第一管 S1 中加入标准品/样品稀释液 900ul,第二至第八管中分别加入标准品/样品稀释液 200ul,在第一管中加入(30000pg/ml)标准品溶液 100ul 置于漩涡混合器上混匀后用加样器吸出 200ul,移至第二管,如此反复作对倍稀释,从第七管中吸出 200ul 弃去,第八管为空白对照。标准曲线浓度为:3000、1500、750、375、187.5、93.75、46.875、0 pg/ml(标准品的用量及标准曲线范围也可根据自己需要配置)。
- 生物素化抗体工作液配置:使用前 20 分钟,用生物素化抗体稀释液将 100×生物素化抗体稀释成 1×工作液,根据所需用量配置,当日使用,剩余弃之。
- TMB 显色液的配置:使用前 10 分钟,将 TMB 显色液 A 液和 B 液 1:1 混合,避光放置备用。
- 如果您检测的样本中靶蛋白浓度高于标准品最高值,建议重新检测,请根据实际情况,适当倍数稀释(建议做预实验,以确定稀释倍数)。
检测程序:
- 加样:空白孔加入 50μl 标准品/样品稀释液,其余孔各加入标准品或待测样品 50ul,将反应板混匀后置 37℃, 40 分钟。
- 洗板:用 1×洗涤液将反应板充分洗涤 4-6 次,每孔加入 1×洗液 350μl,每次震荡/浸泡 1-2 分钟,向滤纸上印干。
- 空白孔加入 100ul 生物素化抗体稀释液,其余孔各加入 1×的生物素化抗体工作液 100ul,混匀后置 37℃,30分钟。
- 洗板:同上。
- 每孔加入 SABC 复合物工作液 100ul,混匀后置 37℃,20 分钟。
- 洗板:同上。
- 每孔加入提前配置好的 TMB 混合液 100ul,混匀后置 37 ℃暗处反应 10-20 分钟(具体显色时间根据显色结果而定)。
- 每孔加入 100ul 终止液,混匀,30 分钟内用酶标仪在 450nm 处测吸光值。
结果判断与计算:
- 所有 OD 值建议减除空白孔值后再进行计算,如空白孔 OD 低于 0.1,也可以直接计算。
- 以标准品浓度作横坐标,OD 值作纵坐标,手工绘制或用软件绘制标准曲线,根据样品 OD 值计算出相应含量,再乘以稀释倍数即可。
试剂盒性能:
1、 灵敏度:可测浓度小于 9.4pg/ml。2、 特异性:同时可检测重组或天然的人 FOLR1 ,不与人其它细胞因子有交叉反应。
3、 重复性:板内,板间变异系数均小于 10%。
注意事项
- 在试验中标准品和样本检测时建议作双孔检测,每次检测都应做标准曲线。
- 洗涤过程很关键,洗涤不充分将导致精确度误差及 OD 值错误地升高,从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶,属于正常现象,37℃水浴使结晶完全溶解后再配制洗涤液。
- 检测时所有试剂都要恢复到室温,板条开封后剩余板条需封好,放回袋中 1 个月内用完。
- 试剂盒使用超敏 TMB 溶液,显色过深时会出现沉淀状,属正常现象,混匀即可,不影响结果判读。
- 说明书以试剂盒内纸质版为准,本试剂盒仅用于科研,不能用于临床诊断!
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文献和实验Warnings And Limitations This product is for research use only. Not intended for any animal or human therapeutic or diagnostic use unless otherwise stated. Follow appropriate laboratory guidelines. This product contains 0.02% sodium azide
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