洋葱黄矮病毒 RT-PCR 检测试剂盒

洋葱黄矮病毒 RT-PCR 检测试剂盒
英文名称：Onion Yellow Dwarf Virus(OYDV) RT-PCR Kit
洋葱黄矮病毒（Onion Yellow Dwarf Virus，OYDV）会引起洋葱黄矮病， 会出现洋葱染病叶生长受抑，叶片扭曲变细，致叶面凹凸不平，叶尖逐渐黄化， 有时产出长短不一的黄绿色斑驳或黄色长条斑等现象，甚至葱管扭曲，生长停滞， 蜡质减少，叶下垂变黄，严重的全株矮化或萎缩，往往会给农业生产带来较大的 经济损失，因此快速灵敏诊断具有重要意义。为此本公司基于 RT-PCR 原理，开 发了可用于在科研领域快速定量检测洋葱黄矮病毒的试剂盒。

产品特点：
1. 一站式，用户不需要单独准备每种成分，包括引物和对照。
2. 根据洋葱黄矮病毒的保守基因序列设计的引物，具有良好的特异性。
3. 灵敏度可以达到 1000 拷贝/反应。
4. 使用一管式 RT-PCR 技术，RT 和 PCR 两步在一个试管内完成，不需要中间 转移样品，降低了操作误差和可能的污染。
5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的 RT-PCR。
6. 本产品只能用于科研，不能用于临床。

洋葱黄矮病毒 RT-PCR 检测试剂盒包装规格及成分：

编号	成分	规格
试剂一	5×双酶一管式 RT-PCR Buffer	200 μL（橘黄 盖）
试剂二	MMLV-Taq Mix	75 μL（红盖）
试剂三	超纯水	1 mL（亮黄盖）
试剂四	洋葱黄矮病毒RT-PCR 引物混合液	100 μL（白盖）
试剂五	洋葱黄矮病毒RT-PCR 阳性对照 （1×10E8 拷贝/μL）	50 μL（黄盖）
说明书	使用手册	1 份

注：为避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供专一的 DNA 片段作为阳性对照。

运输及保存：低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。收到货后阳性对照需要跟其他成分 分开放置，因为其容易污染其他成分，造成假阳性。

自备试剂：样品 RNA

使用方法：

一、样品 RNA 的制备
1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性 对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 洋葱黄矮病毒PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液作为制备的阳性对照。可以用水作为制备的阴性对 照。制备所得成为样品 RNA。
2. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA 提 取试剂盒兼容。可以选购本公司的柱式病毒 RNAout。
二、设置 RT-PCR 反应（20μL 体系）
3. 如果有 N+2 个样品，则标记 N+4 个 PCR 管（额外增加的两个管一个是 RT-PCR 阳性对照，另一个是 RT-PCR 阴性对照）并按照下表在 PCR 管中 加入下列成分：

成分	N+2 个 样品管	RT-PCR 阴性对照	RT-PCR 阳性对照
5×双酶一管式 RT-PCR Buffer	各 4 μL	4 μL	4 μL
洋葱黄矮病毒RT-PCR 引物混合液	各 2 μL	2 μL	2 μL
N+2 个制备的 RNA 样品	各 12.5 μL
超纯水		12.5 μL
洋葱黄矮病毒RT-PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液			12.5 μL
MMLV-Taq Mix	1.5 μL	1.5 μL	1.5 μL

4. 上机进行 RT-PCR，RT-PCR 反应参数为:

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
逆转录	42℃	30 min
PCR 反应 （35 个循环）	95℃	30 sec
	58℃	30 sec
	72℃	20 sec
最后延伸	72℃	7 min

5. 琼脂糖电泳检测扩增效果。如果阴性对照有扩增产物或阳性对照无扩增产物， 则说明实验失败，需要分析实验失败的原因。只有在阴性对照没有扩增产物、 阳性对照必须有 135bp 的条带出现，才有必要分析样品的实验结果，如果有 预期片段大小的扩增产物则为阳性，如果无则为阴性。


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