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文献和实验胶条上覆盖矿物油,防止胶条水化过程中液体的蒸发。需缓慢的加入矿物油,沿着胶条,使矿物油一滴一滴慢慢加在塑料支撑膜上。 IPG 胶条的长度 矿物油体积 7 cm 1 ml 11cm 2 ml 17cm 3 ml 9. 对好正、负极,盖上盖子。设置等电聚焦程序 (以下程序为推荐程序,不同样品需要根据实际情况进行实验条件优化) 。 7cm 胶条 水化 12 小时( 17 ℃) 被动水化 S1 250V 慢速 30 分钟 除盐 S2 1000V 快速 60 分钟 除盐 S3
BAC DNA Isolation from 200 ml Cultures by a Cleared Lysate Method
antibiotic. After incubating at 37 degrees C for 8-10 hours with 250 rpm shaking, the culture is transferred to a 500 ml flask containing 200 ml of the same medium and incubated for 8-10 hours under the same conditions. After harvesting the cells
h 结束:8000V, 64,000Vh。 3. IPG胶条平衡:两步平衡 第一步平衡:IPG胶条分别放入试管内,支持膜贴着管壁。加入10 ml含有DTT的平衡液。每10 ml平衡缓冲液中加入100 mg DTT,用盖子盖住试管或用封口膜封住试管,将其平放在摇床上,平衡15分钟。 第二步平衡:用含碘乙酞胺的平衡溶液(不含DDT)进行第二步平衡,在每10mlSDS平衡缓冲液中加入250 mg碘乙酰胺。 4. SDS-PAGE
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