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- 2025年07月16日
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文献和实验Single Primer ("Semi-Random") P
Reamplification 40 µL H2O 10 µL 10x M-PCRB 10 µL 4 dNTPs @ 2 mM each 10 µL Pn primer @ 5 µM 10 µL Po primer @ 0.2 µM 10 µL DNA from part 1 10 µL "T/TS" @ 0.4 u Taq/µL --------- 100 µL Load glass capillaries and amplify: 30"x94°C 30
Purification of Plasmid from 50 ml-culture
of cold 70% ethanol. Discard the fluid. 14. Add to the pellet 400 ul of TE containing DNase-free RNase A (20 ug/ml). Incubate the tube for 30 min at 37 C. 15. After 30 min, carefully check the content of the tube. If nucleic acid pellet
，此时可见白色絮状沉淀，此即DNA粗制品。 5.用玻棒捞起DNA沉淀，放入小烧杯中，用70%乙醇洗涤沉淀一次，洗涤时动作要轻，防止DNA被切断。 6.沉淀取出放入一干净的塑料离心管中，用lmlTE缓冲液溶解。 7.在lmlDNA溶液中加入10mg/ml的RNA酶20μl，使最终浓度达到200μg/ml，37℃保温30分钟。 8.加入20%SDS25μl，使最终浓度至0.5%；加入0.5mol/l EDTA30μl至20mmol/l；加10mg/ml蛋白酶K20μl，使最终浓度为200μg/ml，50
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