- ￥699 - 1999
- KA&M-BIO
- 上海
- MZ24152
- 2025年06月10日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 英文名：
pT7-GST-TEV
- 库存：
999
- 供应商：
圻明生物
- 规格：
管
1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl无菌水溶解质粒，室温放置1min；
2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态，置于冰盒上解冻，并做好标记；
3、取2μl质粒加至100μl感受态中，冰浴30min；
4、42℃热激90s，再冰浴2min；
5、加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡培养45min；
6、6000rpm离心5min，仅留100ul上清混匀菌体沉淀；
7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上，倒入适量玻璃珠，涂匀液体；
8、将平板正向培养1h，再倒置培养12h~16h；
9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中，震荡培养12h~16h，根据实验需要提取质粒。
pT7-GST-TEV圻明公司现货供应，可按客户需求单独构建载体，
一、载体构建：
(1)目的DNA片段和载体的制备；
(2)目的DNA片段和载体的连接；
(3)连接产物的转化；
(4)克隆筛选。
(5)测序验证及目标质粒交付
二、详细内容
1、以PCR扩增为基础的各类载体构建，如大肠杆菌表达载体、酵母表达载体、杆状病毒表达载体、哺乳动物表达载体；报告基因载体等；
2、基因定点突变，包括单点突变，多点突变，基因缺失等；
3、载体元件替换和改造；
4、siRNA载体和miRNA表达载体构建；
5、过表达载体构建。
详询客服。公司整合了国外数个基因库资源，具有以下优势：
种属齐全：人、小鼠、大鼠、其它种属；
数量众多：多达几万数量cDNA克隆（cDNA模板质粒）和ORF克隆（ORF表达质粒）；
质量优异：保证目的基因序列正确，无氨基酸突变，每个克隆质粒均可提供相应的测序报告；
价格实惠：与您亲自调取基因相比，我们的服务让您更加省时、省力、省心；
pCR-XL-TOPO-ZNF236(human) 大肠杆菌 基因模板 cDNA 人 Kan
pCR-BluntII-TOPO-HTR3D(human) 大肠杆菌 基因模板 cDNA 人 Kan
pCR-XL-TOPO-ACIN1(human) 大肠杆菌 基因模板 cDNA 人 Kan
pCR-XL-TOPO-BZRAP1(human) 大肠杆菌 基因模板 cDNA 人 Kan
pCR-BluntII-TOPO-FAM38A(human) 大肠杆菌 基因模板 cDNA 人 Kan
pCR-BluntII-TOPO-POC5(human) 大肠杆菌 基因模板 cDNA 人 Kan
pCR-BluntII-TOPO-ZNF404(human) 大肠杆菌 基因模板 cDNA 人 Kan
pCR-BluntII-TOPO-TRIM60(human) 大肠杆菌 基因模板 cDNA 人 Kan
pCR-BluntII-TOPO-NT5C1A(human) 大肠杆菌 基因模板 cDNA 人 Kan
pCR-BluntII-TOPO-RGL4(human) 大肠杆菌 基因模板 cDNA 人 Kan
pCR-BluntII-TOPO-ANKRD23(human) 大肠杆菌 基因模板 cDNA 人 Kan
pCR-BluntII-TOPO-PLEKHN1(human) 大肠杆菌 基因模板 cDNA 人 Kan
pCR-XL-TOPO-SLIT1(human) 大肠杆菌 基因模板 cDNA 人 Kan
pCR-BluntII-TOPO-ETV1(human) 大肠杆菌 基因模板 cDNA 人 Kan
pCR-BluntII-TOPO-ANKDD1A(human) 大肠杆菌 基因模板 cDNA 人 Kan
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pCR4-TOPO-ZNF709(human) 大肠杆菌 基因模板 cDNA 人 Amp
pCR4-TOPO-OR2W5(human) 大肠杆菌 基因模板 cDNA 人 Amp
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文献和实验用蛋白或多肽标签融合于重组蛋白中，进而方便重组蛋白的纯化和检验。小分子标签通常免疫原性较低，且不影响目标蛋白功能而得以保留。但是大分子标签如 GST 因其对目标蛋白的结构和生物活性有所影响，通常需要去除。 今天我们就来聊一聊柱上酶切那点事儿~ 什么是柱上酶切 柱上酶切纯化路线是指在吸附了标签蛋白的层析柱上添加蛋白酶进行在位去除标签，具有更加灵活、高效、快速的特点。 相比于常规的洗脱后的酶切纯化路线，柱上酶切不仅可以简化酶切后的再次上样操作，同时可以尽量避免操作过程中目标
蛋白有更好的可溶性。另外，使用NusA系统验证，八个较大分子量蛋白（>70kDa）中的七个得到了可溶性表达，而其它的融合标签（GST，MBP和hexahistidine）系统则只得到了四个可溶性表达的蛋白。 表1. 用大量的目标蛋白评估NusA标签对提高融合蛋白可溶性的作用 参考文献a 目的蛋白数目
, RocheBenzamidine-AgaroseEnterokinase Asp-Asp-Asp-Asp-Lys�New England Biolabs, Novagen, RocheTrypsin Inhibitor-AgaroseTEV protease Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln�GlyInvitrogen – Life Technologies Ni-NTA (6His recomb. TEV)PreScission Leu-Glu-Val-Leu-Phe-Gln�Gly-ProAmersham
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