- ￥2380
- xybio
- XY-sh0771
- 上海
- 2025年07月31日
企业认证
相关产品推荐更多 >
万千商家帮你免费找货
0 人在求购买到急需产品
- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
/
- 保质期：
3个月
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件：
详见说明书
- 规格：
25管/24样
分光光度法 25管/24样
注 意 ：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
二磷酸核酮糖羧化酶（EC 4.1.1.39）是植物光合作用中的一个关键酶，既控制着CO2的固定，同时又制约着碳素向Calvin循环和光呼吸循环分流，其活性的大小直接影响着光合速率。
测定原理：
在Rubisco的催化下，1分子的核酮糖-1，5-二磷酸（RuBP）与1分子的CO2结合，产生2分子的3-磷酸甘油酸（PGA），PGA可通过外加的3-磷酸甘油酸激酶和甘油醛-3-磷酸脱氢酶的作用，产生甘油醛-3-磷酸，并使还原型辅酶I（NADH）氧化。因此，340nm吸光度的变化可计算还原型辅酶I氧化速率，还原型辅酶I氧化速率可反应Rubisco的活性。
需自备的仪器和用品：
可见-紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制：
提取液一：液体25mL×1瓶，4℃保存。
提取液二：液体25mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：30mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前加入12.5mL试剂一，充分混匀待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
试剂三：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前加入12.5mL试剂一，充分混匀待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
试剂四：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前加入1.25 mL试剂一，充分溶解待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
（注意：试剂二、三、四溶解后，按需分装-20℃保存。）
粗酶液制备：
①总Rubisco酶提取：建议称取约0.1g样本，加入1mL提取液一，冰浴匀浆后超声破碎（冰浴，200W，破碎3s，间歇7s，总时间1min），然后4℃，8000g离心10min，取上清测定。
②胞浆和叶绿体Rubisco酶的分离：按照植物组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5～10的比例（建议称取约0.1g样本，加入1mL提取液一），冰浴匀浆后于4℃，200g离心5min，弃沉淀，取上清在4℃，8000g离心10min，取上清用于测定胞浆Rubisco酶活性，取沉淀加1mL提取液二，震荡溶解后超声破碎（冰浴，200W，破碎3s，间歇7s，总时间1min），然后4℃，8000g离心10min，取上清测定叶绿体中Rubisco酶活性。
建议测定总Rubisco酶活性，按照步骤①提取粗酶液，若需要分别测定胞浆和叶绿体中的Rubisco，则按照步骤②提取粗酶液。
（注意：粗酶液制备过程中超声破碎操作使用细胞破碎仪进行。）
测定步骤：
- 分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
- 样本测定
- 工作液的配制：临用前将试剂二和试剂三1：1混合，用多少配多少；
- 在1mL石英比色皿中加入50uL样本、50uL试剂四和900uL工作液，混匀，立即记录340nm处20s时吸光值A1和5min20s时的吸光值A2，计算ΔA=A1-A2。
Rubisco活性计算：
1、按样本蛋白浓度计算
单位的定义：25℃中1 mg蛋白1 min氧化1 n mol NADH。
Rubisco（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样×Cpr) ÷T =643×ΔA÷Cpr
此法需要测定粗酶液中蛋白质浓度，建议选购本公司生产的BCA蛋白质浓度测定试剂盒。
2、按样本鲜重计算
单位的定义：25℃中1 g组织1 min氧化1 nmol NADH。
Rubisco（nmol/min/g 鲜重）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样÷V样总×W) ÷T=643×ΔA÷W
上述计算公式中各符合含义：
V反总：反应体系总体积，1×10-3 L；ε：NADH摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.05 mL；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，5 min；W：样本质量，g
风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验核酮糖－1，5－二磷酸羧化酶（ribulose－1，5－bisphosphatecarboxylase，RuBPCase）是光合作用碳代谢中的重要的调节酶，是植物中最丰富的蛋白质，主要存在于叶绿体的可溶部分，总量约占叶绿体可溶蛋白50％～60％。本实验用分光光度法测定酶的羧化能力。一、原理： 在RuBPCase的催化下，1分子的核酮糖－1，5－二磷酸（RuBP）与1分子的CO2结合，产生2分子的3－磷酸甘油酸（PGA），PGA可通过外加的3－磷酸甘油酸激酶和甘油醛－3－磷酸脱氢酶的作用，产生
尔化学奖。（一）C3途径的反应过程C3途径是光合碳代谢中最基本的循环，是所有放氧光合生物所共有的同化CO2的途径。1.过程 由RuBP开始至RuBP再生结束，共有14步反应，均在叶绿体的基质中进行。全过程分为羧化、还原、再生3个阶段。(1)羧化阶段(carboxylation phase) 指进入叶绿体的CO2与受体RuBP结合，并水解产生PGA的反应过程。以固定3分子CO2为例：3RuBP+3CO2+3H2O PGA + 6H+核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶(Rubisco)具有双重功能，既能使RuBP
经膜上的运转器(translocator)才能通过；蔗糖、C5`C7糖的二磷酸酯、NADP+、PPi等物质则不能通过。2.基质及内含物 被膜以内的基础物质称为基质(stroma)，基质以水为主体，内含多种离子、低分子的有机物，以及多种可溶性蛋白质等。基质是进行碳同化的场所，它含有还原CO2与合成淀粉的全部酶系，其中1，5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(ribulose1,5bisphosphate carboxylase/oxygenase,Rubisco)占基质总蛋白的一半以上。此外，基质中含有氨
