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- xybio
- XY-sh0711
- 上海
- 2025年07月27日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
/
- 保质期：
3个月
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件：
详见说明书
- 规格：
100管/96样
微量法100管/96样
注 意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
脱氢酶(dehydrogenase, DHA) 是一类催化物质氧化还原反应的酶，催化底物通过细胞色素系统被氧化，释放的能量供机体使用，是生物体取得能量的一种方式。
测定原理：
在细胞呼吸过程中，氢受体2, 3, 5 - 氯化三苯基四氮唑（2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride, TTC）在脱氢酶作用下接受氢以后，被还原为三苯基甲鐟（Triphenyl Formazone, TF），TF呈现红色，于485nm测定其吸光值，即得脱氢酶活性。
自备实验仪器及用品：
筛子、天平、恒温培养箱或水浴锅、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、冰、蒸馏水、甲醇（不允许快递，请用户自备）。
试剂的组成和配制：
提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存
试剂一：粉剂×1瓶，使用前加10mL试剂二溶解，4℃避光保存（尽量现配现用）。
试剂二：液体20mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：甲醇，自备。
样品处理：
- 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
- 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后8000g，4℃，离心20min。
- 液体：直接检测。
测定步骤和操作表：
| 空白管 | 测定管 | |
| 样品（μL） | 100 | |
| 蒸馏水（μL） | 100 | |
| 试剂一（μL） | 100 | |
| 试剂二（μL） | 100 | |
| 充分混匀，37℃培养24h | ||
| 试剂三（μL） | 900 | 900 |
| 振荡1h，8000g，25℃，离心5min，取200μL上清于微量石英比色皿/96孔板，测定A485，△A=A测定-A空白管。空白管只要做一管。 | ||
脱氢酶活力计算：
- 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1.按照蛋白浓度计算
酶活单位定义：在37℃时，每mg蛋白样品每min催化产生1μgTF为一个酶活性单位。
DHA（μg/ min / mg prot）=（△A+0.0312）÷ 0.0422×V反总÷（Cpr×V样）÷T= 0.181×（△A+0.0312）÷Cpr
2．按照样本质量计算
酶活单位定义：在37℃时，每克样品每min催化产生1μgTF为一个酶活性单位。
DHA（μg/ min /g 鲜重）=（△A+0.0312）÷ 0.0422×V反总÷（W×V样÷V样总）÷T= 0.181×（△A+0.0312）÷W
3. 按液体体积计算
酶活单位定义：在37℃时，每mL样本每min催化产生1μgTF为一个酶活性单位。
DHA（μg/ min /mL）=（△A+0.0312）÷ 0.0422×V反总÷V样÷T= 0.181×（△A+0.0312）
V反总：反应总体积，1.1mL；V样：加入反应体系中样本体积，0.1mL；T：培养时间，1d=1440min；W：样品质量，g；Cpr：蛋白浓度，mg/mL。
b. 用96孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y = 0.0211x - 0.0312；R2 = 0.9988；x为标准品浓度（μg/mL），y为吸光值。
1.按照蛋白浓度计算
酶活单位定义：在37℃时，每mg蛋白样品每min催化产生1μgTF为一个酶活性单位。
DHA（μg/ min / mg prot）=（△A+0.0312）÷ 0.0211×V反总÷（Cpr×V样）÷T= 0.362×（△A+0.0312）÷Cpr
2．按照样本质量计算
酶活单位定义：在37℃时，每克样品每min催化产生1μgTF为一个酶活性单位。
DHA（μg/ min /g 鲜重）=（△A+0.0312）÷ 0.0211×V反总÷（W×V样÷V样总）÷T= 0.362×（△A+0.0312）÷W
3. 按液体体积计算
酶活单位定义：在37℃时，每mL样本每min催化产生1μgTF为一个酶活性单位。
DHA（μg/ min /mL）=（△A+0.0312）÷ 0.0211×V反总÷V样÷T= 0.362×（△A+0.0312）
V反总：反应总体积，1.1mL；V样：加入反应体系中样本体积，0.1mL；T：培养时间，1d=1440min；W：样品质量，g；Cpr：蛋白浓度，mg/mL。
注意事项：
配制好的试剂一避光保存于4℃，最好在一周内使用，若出现红色，则不能使用。
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文献和实验C19 H28 O2 ， 3β -羟基 -5-雄烯 -17-酮。亦称脱氢异雄酮，缩写 DHA或 DHEA。是睾酮生物合成中的一个中间产物，主要是由 17β -羟甾醇脱氢酶而生成雄烯 -3β、 17β -二醇，△ 5 -3β -羟甾脱氢酶和△ 5 ，△ 4 -异化酶的作用生成睾酮。具有较弱的雄性激素作用，可以从尿中检测出来，经常以硫酸酯形态排出。认为这些是来自副肾的雄激素。在胎儿的副肾中产生的这种甾体，在肝等中接受 16α羟基化后，在胎盘中成为雌三醇
将活的细胞与有机残体(如已经死亡的微生物残体) 区分开，用它来作为衡量生物量的指标并不准确。为此，人们开始尝试用脱氢酶活性(DHA)、比耗氧速率(SOUR) 和三磷酸腺苷(ATP) 等生物指标来反映微生物活性。而在这些指标中，ATP广泛存在于生物细胞内，是生物体内能量代谢的重要产物和细胞代谢可利用能量的携带者，并参与生物体内蛋白质、脂肪的生化合成、吸收等反应。所以，通过测定ATP含量的多少，可以直接反映细胞活性、微生物的数量，而且它的测定方法简单快速。将ATP应用于污泥生物活性的检测，已经引起广泛
内质网）催化脱氢生产，这个酶只催化在delta9形成双键，所以亚油酸、亚麻酸等不能在体内合成或合成不足，但他们又是机体不可缺少的，必须由食物来供给，因此叫他们为必需脂肪酸。但植物中含有能在delta9处形成双键的去饱和酶？？？重新修改。（亚麻酸在体内====廿碳五烯酸EPA和廿碳六烯酸DHA；EPA和DHA在鱼油中含量丰富，可通过食入补充。）6. 试述脂肪在体内能否转变为糖？为什么？ 糖酵解的产物乙酰CoA在糖的有氧氧化的第一步中是丙酮酸转变为乙酰CoA， 这个反应是有丙酮酸脱氢酶复合体催化
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