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- xybio
- XY-sh0704
- 上海
- 2025年07月26日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
/
- 保质期：
3个月
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件：
详见说明书
- 规格：
50管/48样
分光光度法50管/48样
注 意 ： 正式测定前取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
生物碱存在于自然界（主要为植物，但有的也存在于动物）中的一类含氮的碱性有机化合物， 大多数有复杂的环状结构，氮素多包含在环内，有显著的生物活性，是中草药中重要的有效成分之一。
测定原理：
生物碱与溴甲-酚绿指示剂反应，生成绿色化合物，在 416nm 处有最大吸收峰。需自备的仪器和用品：
分光光度计、水浴锅、超声波清洗器、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、80%乙醇、氯仿和蒸馏水。试剂的组成和配制：
试剂一：液体 10mL× 1 瓶，4℃保存； 试剂二：液体 50mL × 1 瓶，4℃保存；试剂三：液体 20mL × 1 瓶，4℃避光保存；
生物碱的提取：
样本烘干粉碎，过 80 目筛。称取约 0.1g 样本，加入 0.1mL 试剂一，再加入 0.9,mL80%乙醇， 充分混匀后转移到EP 管中，超声波提取 60min， 8000 g，25℃离心 10 min，取上清液待测。另取空 EP 管，加入 0.1mL 试剂一和 0.9,mL80%乙醇，混匀后作为空白液。测定步骤：
1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 416nm 处。2、操作表：在EP 管中加入如下试剂
| 试剂名称（µL ） | 空白管 | 测定管 |
| 样本 | 150 | |
| 空白液 | 150 | |
| 试剂二 | 750 | 750 |
| 试剂三 | 300 | 300 |
| 氯仿 | 1500 | 1500 |
生物碱含量计算：
标准条件下测定的回归方程为 y = 3.83x - 0.0005，R2 = 0.9942；x 为标准品浓度（mg/mL），y 为 ΔA。
生物碱含量(mg/g 干重)=(ΔA+0.0005)÷3.83×V 样总÷W= 0.261×(ΔA+0.0005) ÷W
V 样总：加入提取液体积，1mL；W：样本鲜重，g。
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文献和实验(7)式或(9)式可计算叶绿素总量。 叶绿体色素的提取液中除含有叶绿素a与b外，还含有叶黄素和胡萝卜素，因为叶黄素和胡萝卜素的吸收光谱均在蓝光区，故不会干扰叶绿素含量在红光区的分光光度法测定。 器材与试剂 722分光光度计，叶绿体色素提取所需器材。 方法与步骤 1. 提取叶绿素。 2. 测定光密度。 在1cm比色杯中，注入叶绿素提取液(浓度大时需稀释)。另以叶绿素提取介质作为参比溶液注入同样的比色杯中。根据实验要求，选用相应的波长(测总量选用652nm，测叶绿素a、b含量
吸收峰。据此所测得的吸光度值代人不同的经验公式（见结果计算），计算出叶绿体色素丙酮（或乙醇）提取液中叶绿素 a 和 b 的浓度及其叶绿素总浓度和类胡萝卜素的总浓度，并依据所使用的单位植物组织（鲜重、干重或面积），求算出色素的含量。 [ 实验目的 ] 掌握分光光度法对植物叶绿体色素提取液中叶绿素 a 和 b 的浓度及其叶绿素总浓度和类胡萝卜素的总浓度测定与计算方法，以及植物材料中各种色素含量的求算方法。 [ 器材和试剂 ] 1 ．植物材料 新鲜（或烘干）植物叶片，如菠菜叶片等。 2 ．实验
、45.6为叶绿素a、b在波长645nm时的比吸收系数。解方程式（1）（2），则得：此时，CT为总叶绿素浓度，CA 、CB为叶绿素a、b的浓度，单位为每升毫克，利用上面（3）（4）（5）式，即可以计算a、b总叶绿素的浓度。二、仪器药品 扭力天平 剪刀 研钵 移液管 漏斗 大试管 丙酮 碳酸钙 石英砂 721型分光光度计（如有其他精密型号的分光光度计则更好）三、实验步骤 1、提取叶绿素从植株上选取有代表性的叶片数张，于扭力天平上称取0.1g鲜重，剪碎后置于研钵中，加蒸馏水5－6ml，碳酸钙少许及适量
