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- xybio
- XY-sh0465
- 上海
- 2025年07月17日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
/
- 保质期：
3个月
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件：
详见说明书
- 规格：
50管/24样
试剂盒说明书
分光光度法50管/24样
注 意 ：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
蔗糖转化酶（Invertase，Ivr）催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖，是高等植物蔗糖代谢关键酶之一。根据最适 pH，Ivr分为酸性转化酶（AI）和中性转化酶（NI）两种类型。
AI的最适pH为3～5。AI分为可溶性AI(S-AI)和细胞壁不溶性AI（B-AI）两种类型。B-AI存在于细胞间隙并结合在细胞壁上，主要参与韧皮部质外体卸载时蔗糖的分解，以维持库源之间蔗糖的浓度。
测定原理：
B-AI催化蔗糖降解产生还原糖，进一步与3,5－二硝基水杨酸反应，生成棕红色氨基化合物，在510nm有特征光吸收，在一定范围内510nm光吸收增加速率与B-AI活性成正比。
自备用品：
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液1：液体50mL×1瓶，4℃保存;
提取液2：液体50mL×1瓶，4℃保存;
试剂一：液体50mL×1瓶，4℃保存;
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入25mL试剂一充分溶解备用；用不完的试剂4℃保存;
试剂三：液体30mL×1瓶，4℃保存；
粗酶液提取：
按照组织质量（g）：提取液1体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液1），进行冰浴匀浆。12000g 4℃离心10min，弃上清，沉淀中加入1mL蒸馏水，充分震荡混匀，12000g 4℃离心10min，弃上清，沉淀中加入1mL提取液2 充分混匀，4℃浸提过夜，12000g 4℃离心20min，取上清置冰上待测。
测定步骤和加样表：
| 试剂名称（μL） | 测定管 | 对照管 |
| 样本 | 200 | 200 |
| 试剂一 | 800 | |
| 试剂二 | 800 |
浓度不变）
| 试剂三 | 500 | 500 |
B-AI活性计算：
标准条件下测定的回归方程为y = 0.0016x -0.001；x为标准品浓度（μg/mL），y为吸光值。
（1）按蛋白浓度计算：
单位的定义：37℃每mg蛋白每分钟产生1μg还原糖定义为一个酶活性单位。
B-AI活性（μg/min/mg prot）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V1]÷(V1×Cpr ) ÷T=20.8×(ΔA +0.001) ÷Cpr
（2）按鲜重计算：
单位的定义：37℃每g组织每分钟产生1μg还原糖定义为一个酶活性单位。
B-AI活性（μg/min/g鲜重）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V1]÷(W ×V1÷V2) ÷T =20.8×(ΔA +0.001) ÷W
V1：加入反应体系中样本体积，0.2mL；V2：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，30min； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g
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文献和实验%）仍具有很高的应用价值。 RNA 提制过程首先要使RNA 从细胞中释放，并使它和蛋白质分离，然后将菌体除去。再根据核酸在等电点时溶解度最小的性质，将pH 调至2.0～2.5，使RNA 沉淀，进行离心收集。然后运用RNA 不溶于有机溶剂乙醇的特性，以乙醇洗涤RNA 沉淀。提取RNA 的方法很多，在工业生产上常用的是稀碱法和浓盐法。稀碱法利用细胞壁在稀碱条件下溶解，使RNA 释放出来，这种方法提取时间短，但RNA 在稀碱条件下不稳定，容易被碱分解；浓盐法是在加热的条件下，利用高浓度的盐
sec ，弃尽上清。 （2）破壁和匀浆 用户可选择酶法或碾磨法破坏细胞壁。酶法是用Lyticase 消化细胞壁，将酵母菌制成原生质体。 碾磨法是用机械力破坏细胞壁。两种方法在RNA 的纯度和得率上无任何差别。 A.酶法 （a）用1ml 已加入70U Lyticase 的酵母菌原生质体制备缓冲液悬浮酵母菌沉淀，30℃温育10～30min。 （b）4℃，3000×g 离心5min，弃尽上清。 （c）加0.45ml 4℃预冷的Buffer R-A，立即用带4～6号针头的1ml 注射器反复吸注
化合物的有效结合剂。在提取线粒体时加入可溶性PVP，提取可溶性酶时加入不溶性交联PVP（Polyvinyl polypyrrolidone，简称PVPP，或PolyclarAT），能有效地降低提取液中酚的含量。PVPP含有微量金属元素及PVP单体，可加10%HCl煮沸10分钟，用NaOH中和，再用水洗几次，直至中性，纯化后的PVPP不必干燥就可直接应用。 植物细胞有坚韧的细胞壁，需要强烈的方法去破碎，少量样品可用研钵加石英砂研磨，或用玻璃匀浆器。大量样品则需用电动匀浆器。为减低研磨或匀浆过程中
