组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液一)进行冰浴匀浆,10000g,4℃,离心10min,弃沉淀;把上清转移到另一预冷的离心管,10000g,4℃,离心30min,弃上清;加入1.0 mL预冷的提取液二,震荡混匀,16000g,4℃,离心40min,弃上清;沉淀加入预冷的1.0 mL 试剂一,震荡混匀,即粗酶液(可用于可溶性蛋白浓度测定)取上清置于冰上待测。
细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后10000g,4℃,离心10min,弃沉淀;把上清转移到另一预冷的离心管,10000g,4℃,离心30min,弃上清;加入1.0 mL预冷的提取液二,震荡混匀,16000g,4℃,离心40min,弃上清;沉淀加入预冷的1.0 mL 试剂一,震荡混匀,即粗酶液(可用于可溶性蛋白浓度测定),取上清置于冰上待测。