本试剂盒仅供科研使用
硫氧还蛋白过氧化物酶（Thioredoxin peroxidase）试剂盒说明书
（货号：WS7120F 分光法 48 样）
一、产品简介：
硫氧还蛋白过氧化物酶（TPx）属于过氧化物酶家族，普遍存在于各种生物体内，主要还
原过氧化氢和一些氢过氧化物来实现抗氧化作用，功能与 GPX 类似，也是谷胱甘肽氧化还
原循环关键酶之一。具有抗氧化和调节由过氧化氢介导的信号转导和免疫反应等功能。
本试剂盒利用 TPX 催化 H2O2氧化二硫苏糖醇（DTT），通过用硫 qing酸铁法检测剩余 H2O2，
由于形成的化合物于 475nm 处的吸光值，进而计算出 TPX 活性大小。
二、试剂盒组分与配制
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 60mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
液体 20mL×1 瓶
4℃保存
试剂二
粉体 mg×3 支
4℃保存
用前甩几下使试剂落入底部，每支加
2mL 蒸馏水溶解，三天内用完。
试剂三
液体 mL×1 支
4℃保存
用前甩几下使试剂落入底部，取 11μL
至新 EP 管中，再加 1.1mL 蒸馏水混
匀，接着再用蒸馏水稀释 100 倍备用。
试剂四
3mL×1 瓶
4℃保存
试剂五
粉体 mg×4 支
4℃保存
用前甩几下使试剂落入底部，每支加
1.5mL 蒸馏水溶解，现配现用。
试剂六
2.5mL×1 支
4℃保存
三、所需的仪器和用品：
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、低温离心机、移液器、研钵、冰。
四、硫氧还蛋白过氧化物酶（TPx）活性测定：
1、样本制备：
① 组织样本：称取约 0.1g 组织（水分充足样本可取 0.5g），加入 1mL 提取液，在 4ºC
或冰浴进行匀浆。4ºC 约 12,000rpm 离心 10min，取上清作为待测样品。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量（
g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取
② 细菌/细胞样本：
先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液，
在 4ºC 或冰浴进行匀浆。4ºC 约 12,000rpm 离心 10min，取上清作为待测样品。
【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（104）：提取液（mL）为 500~1000：1 的比例进行提取。
③ 液体样本：直接测定。
2、上机检测：
① 可见分光光度计预热 30 min，调节波长到 475nm，蒸馏水调零。
② 所有试剂解冻至室温（25℃），在 EP 管中依次加入：
试剂名称（μL）
测定管
空白管（仅做一次）
样本
20
蒸馏水
20
试剂一
330
330
试剂二
100
100本试剂盒仅供科研使用
2
混匀，室温（25℃）孵育 5min
试剂三
50
50
混匀，室温（25℃）反应 2min
试剂四
50
50
试剂五
100
100
试剂六
50
50
混匀，测定管需室温（25℃）12000rpm 离心 2min，再同
空白管一起取全部澄清液体至 1mL 玻璃比色皿（光径
1cm）中，立即于 475nm 处读值，△A=A 空白-A 测定。
【注】若测定管没有颜色即 TPx 活性高，需减少样本加样体积 V1(如减至 5μL，则试剂一相应增
加)，或缩短反应时间 T(如室温反应 2min 缩至 1min 或更短)；若△A 在零附近即测定管颜
色接近空白管，需增加加样体积 V1(如增至 40μL，则试剂一相应减少)，或延长反应时间
T(如延至 5min 或更长)；则改变后的 V1 和 T 需代入计算公式重新计算。
五、结果计算：
1.标准曲线：y=23.837x - 0.0278。x 是 H2O2摩尔质量（μmoL），y 为吸光值△A 。
2. 按蛋白浓度计算：
酶活定义：每毫克蛋白每分钟降解 1μmoLH2O2为 1 个酶活单位。
TPx 酶活 (μmoL/min/mg prot)=[(△A+0.0278)÷23.837]÷(Cpr×V1)÷T×D
=1.05×(△A+0.0278)÷Cpr×D
3. 按样本质量计算：
酶活定义：每克样本每分钟氧化降解 1μmoLH2O2为 1 个酶活单位。
TPx 酶活 (μmoL/min/g 鲜重)=[(△A+0.0278)÷23.837] ÷(W×V1÷V)÷T×D
=1.05×(△A+0.0278)÷W×D
4. 按细胞数量计算：
酶活定义：每 104个细胞每分钟降解 1μmoLH2O2为 1 个酶活单位。
TPx 酶活(μmoL/min/104 cell)=[(△A+0.0278)÷23.837]÷(细胞数量×V1÷V)÷T×D
=1.05×(△A+0.0278)÷细胞数量×D
5. 按液体体积计算：
酶活定义：每毫升液体每分钟降解 1μmoLH2O2为 1 个酶活单位。
TPx 酶活(μmoL/min/mL)=[(△A+0.0278)÷23.837]÷V1÷T×D=1.05×(△A+0.0278)×D
V---提取液体积，1 mL；
V1---上清液体积，20μL =0.02 mL；
D----稀释倍数；
W---样本质量，g；
T---反应时间，2min；
Cpr---上清液蛋白浓度（mg/mL）；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
附：标准曲线制作过程：
1
标准品母液（1μmoL/mL）：即稀释 100 倍后备用的试剂三。
2
把母液稀释成六个梯度：0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1μmoL/mL。
3
在 EP 管依次加入：20μL 蒸馏水+430μL 试剂一+50μL 标准品+50μL 试剂四+100μL 试剂五+50μL
试剂六，混匀取澄清液体至 1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）中，立即于 475nm 处读值，依据结果即
可制作标准曲线。
文献和实验
