- ￥580
- xybio
- XY-sh0539
- 上海
- 2025年07月22日
企业认证
相关产品推荐更多 >
万千商家帮你免费找货
0 人在求购买到急需产品
- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
/
- 保质期：
3个月
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件：
详见说明书
- 规格：
50管/48样
分光光度法 50管/48样
注 意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
细胞色素P450酶是一组主要存在于肝脏的同工酶，在外源物质代谢中具有重要作用，尤其是药物和毒物的代谢。NCR作为P450酶系的重要一员，催化氧化型P450还原再生。
测定原理：
NCR催化NADPH还原氧化型细胞色素c生成还原型细胞色素c，还原型细胞色素c在550nm处有特征吸收峰；通过测定550nm吸光度的增加速率，来计算NCR活性。
自备仪器和用品：
可见分光光度计、普通离心机，超速离心机、可调式移液枪、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加100mL蒸馏水充分溶解。
试剂二：液体×1瓶，4℃保存。
试剂三：粉剂×1瓶，-20℃保存。临用前配制，加2.6 mL蒸馏水充分溶解，4℃保存。
试剂四：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前配制，加550 μL蒸馏水充分溶解，4℃保存。
粗酶液提取：
1、除去细胞核和线粒体等：称约0.5g组织，加入4℃预冷的1 mL试剂一，冰上充分研磨，10 000g 4℃离心30min，取上清液，转移到超速离心管中。
2、粗制微粒体：4℃，100 000g，离心60min，弃上清液。
3、除血红蛋白等杂质：向步骤2的沉淀中加1 mL试剂一，盖紧后充分震荡溶解，100 000g离心30min，弃上清液。
4、最终微粒体：向步骤3的沉淀中加试剂二0.5 mL，盖紧后充分震荡溶解，4℃保存待测。
测定操作：
1. 分光光度计预热30 min，调节波长到550 nm，蒸馏水调零。
2. 试剂二在37℃水浴中预热30min。
3. 空白管：取1mL玻璃比色皿，依次加入50μL蒸馏水、900μL试剂二、50μL试剂三和10μL试剂四，迅速混匀后于550nm处测定2min内吸光值变化，第10 s和第130 s吸光值分别记为A1和A2，△A空白管=A2-A1。
4. 测定管：取1mL玻璃比色皿，依次加入50μL粗酶液、900μL试剂二、50μL试剂三和10μL试剂四，迅速混匀后于550nm处测定2min内吸光值变化，第10 s和第130 s吸光值分别记为A3和A4，△A测定管=A4-A3。
注意：空白管只需要做一次。
计算公式：
(1).按照蛋白浓度计算
活性单位定义：37℃中，每毫克蛋白每分钟催化产生1nmol还原型细胞色素C为1个酶活单位。
NCR酶活性 (nmol/min/mg prot)= (△A测定管-△A空白管)÷ε÷d×V反总÷（Cpr×V样）÷T
= 529×(△A测定管-△A空白管)÷Cpr
(2)按照样本质量计算
活性单位定义：37℃中，每克样品每分钟催化产生1nmol还原型细胞色素C为1个酶活单位。
NCR酶活性(nmol/min/g 鲜重)= (△A测定管-△A空白管)÷ε÷d×V反总÷（W×V样÷V样总）÷ T
= 265×(△A测定管-△A空白管)÷W
ε：还原型细胞色素C摩尔消光系数，19100L/mol/cm=0.0191L/μmol/cm；d：比色皿光径，1cm；V反总：反应体系总体积，1010μL=0.00101L；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL，需要另外测定；V样：加入反应体系中上清液体积，50μL=0.05mL；V样总：加入提取液体积，0.5mL；W：样本质量，g；T：反应时间，2min。
注意事项：
试剂三、试剂四临用前配制，配好未使用完的4℃可保存两天
风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验问：有关测定醛糖还原酶活性时的反应体系有以下几个疑问：1、67mmol/l钠钾磷酸盐缓冲液如何配置？也有人 用50mmol/l的磷酸钾缓冲液二者哪一种更好。2、整个反映体系配置须注意哪些问题？最后加DL-甘油醛还是NADPH。3、NADPH标准曲线绘制分别用多大浓度？请各位指教，谢谢。答：在测定酶的活性时，有时由于酶的纯化不足，导致影响结果，在检测醛糖还原酶活性时要注意以下几点：（一）其它酶和物质的干扰如组织匀浆中往往含有NADH-细胞色素C还原酶，它将干扰各种还原酶的测定。临床酶测定中最典型
C的还原法来检测O2-是因为还原后的cytochrome C会生成紫色的染料（图解 2）。这是自SOD被发现以来最常用的方法 Cyt(FeⅢ) + O2- —> Cyt(FeⅡ) + O2 因为cytochrome C很容易被NADPH还原酶或者其他的还原剂所还原，因此必须要考虑样品的污染因素。而且，这种方法需要每隔1.5分钟就要察看一下，因此不适合做大批量的实验。NBT法的原理是生成不溶于水的蓝色甲臢染料(max: 560 nm)去和O2-反应。这种染料不溶于水，在做长时程分析时会
自SOD被发现以来最常用的方法。 Cyt(FeⅢ) + O2- ―> Cyt(FeⅡ) + O2 因为cytochrome C很容易被NADPH还原酶或者其他的还原剂所还原，因此必须要考虑样品的污染因素。而且，这种方法需要每隔1.5分钟就要察看一下，因此不适合做大批量的实验。NBT法的原理是生成不溶于水的蓝色甲染料(lmax: 560 nm)去和O2-反应。这种染料不溶于水，在做长时程分析时会生成不均一的沉淀物，从而影响实验数据的重现性。为了得到水溶性的甲染料，许多改良后的方法如添加BSA
