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100
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/
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3个月
- 供应商:
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件:
详见说明书
- 规格:
50管/24样
分光光度法50管/24样
注 意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
DBE能够专一性地裂解支链淀粉的α-1,6糖苷键,产生线性的葡萄糖链,在调整支链淀粉分子的链长方面有重要的作用。
测定原理
采用3,5-二硝基水杨酸法测定DBE催化支链淀粉产生的还原糖,通过测定还原糖含量的变化来计算DBE活性。
需自备的的仪器和用品
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰、蒸馏水
试剂的组成和配制
提取液:液体60mL×1瓶,4℃保存;
试剂一:液体15mL×1瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×1支,4℃保存;临用前每支加入6mL试剂一,充分混匀后备用;用不完的试剂4℃保存;
试剂三:液体12mL×1瓶,4℃保存;
试剂四:液体35mL×1瓶,4℃保存。
粗酶液提取
按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。15000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
测定步骤
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长到540 nm,蒸馏水调零。
2、加样表
| 试剂名称(μL) | 对照管 | 测定管 |
| 95℃水浴5min后灭活的样本 | 200 | |
| 粗酶液 | 200 | |
| 试剂一 | 200 | |
| 试剂二 | 200 |
| 试剂三 | 200 | 200 |
| 试剂四 | 600 | 600 |
注 意:可以在不同对照管中加入不同样品的粗酶液,然后集中进行5min 95℃沸水浴处理。
DBE活力单位的计算
标准条件测定回归方程为y = 3.8458x - 0.165;x为标准品浓度(mg/mL),y为吸光值。
(1)按照蛋白浓度计算
单位的定义:每mg组织蛋白每h催化产生1mg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
DBE活力(mg /min /mg prot)=[ (ΔA+0.165)÷3.8458×V反总]÷(V样×Cpr)÷T
=0.26× (ΔA+0.165) ÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
单位的定义:每g组织每分钟催化产生1mg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
DBE活力(mg /min /g鲜重)=[ (ΔA+0.165)÷3.8458×V反总]÷(W× V样÷V样总)÷T
=0.26× (ΔA+0.165) ÷W
V反总:反应体系总体积,0.4mL; V样:加入样本体积,0.2mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,2 h;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g。
标准曲线线性范围为0.1mg/mL-1mg/mL。
ΔA线性范围为0.01-2。
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文献和实验三、仪器和试剂 仪器 高压液相色谱仪 带紫外分光检测器、旋转蒸发器、高速离心机;小离心管:具塑料盖1.5~3.0mL塑料离心管(与高速离心机配套)、高纯氮气、恒温水浴锅、紫外分光光度计。 2.试剂 实验用水为蒸馏水。试剂不加说明为分析纯。 1.无水乙醚:重蒸,不含有过氧化物。 过氧化物检查方法:用5mL 乙醚加1mL 10%碘化钾溶液,振摇1min。如有过氧化物则放出游离碘,水层呈黄色或加4滴0.5%淀粉液,水层呈蓝色。 去除过氧化物的方法:瓶中放
快速老化痴呆模型小白鼠SAMP8, SAMP10老化特征研究进展
表达差异,发现6个差异表达的基因,序列分析表明W4和W5 cDNA片段属未知基因,W1和W6分别显示出与大鼠eIF-2B和磷脂酶D基因66.1%和62.3%的同源性,W2和W3分别显示与人类大疱性类天疮抗原和人糖原脱分支酶同工酶1/2/3/4/6 89.2%和90.8%的同源性,说明这些基因与P8脑功能障碍有关。 同时,Wei等通过RT-PCR分析了AD相关基因包括β-淀粉样前体蛋白(APP), 早老性蛋白1(PS-1),早老性蛋白2(PS-2),apoE, tau蛋白, c-fos, 神经
,ν为质点移动速度,当质点在电场中作稳定运动时:F=F′即QE=6πrην。可见,球形质点的迁移率,首先取决于自身状态,即与所带电量成正比,与其半径及介质粘度成反比。除了自身状态的因素外,电泳体系中其它因素也影响质点的电泳迁移率。电泳法可分为自由电泳(无支持体)及区带电泳(有支持体)两大类。前者包括Tise-leas式微量电泳、显微电泳、等电聚焦电泳、等速电泳及密度梯度电泳。区带电泳则包括滤纸电泳(常压及高压)、薄层电泳(薄膜及薄板)、凝胶电泳(琼脂、琼脂糖、淀粉胶、聚丙烯酰胺凝胶)等。自由电泳法











