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淀粉脱分支酶(DBE)测试盒(可见分光光度法)

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  • 上海
  • 2026年03月16日
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    • 保质期

      3个月

    • 供应商

      上海烜雅生物科技有限公司

    • 保存条件

      详见说明书

    • 规格

      50管/24样

    淀粉分支酶(Starch debranching enzyme,DBE)试剂盒说明书
                                                                       分光光度法50/24

        正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
    测定意义
    DBE能够专一性地裂解支链淀粉的α-16糖苷键,产生线性的葡萄糖链,在调整支链淀粉分子的链长方面有重要的作用

    测定原理
    采用35-二硝基水杨酸法测定DBE催化支链淀粉产生的还原糖,通过测定还原糖含量的变化来计算DBE活性

    需自备的的仪器和用品
    可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰、蒸馏水

    试剂的组成和配制
    提取液液体60mL×1瓶,4保存;
    试剂一:液体15mL×1瓶,4保存;
    试剂二:粉剂×1,4保存;临用前每支加入6mL试剂一,充分混匀后备用;用不完的试剂4保存;
    试剂三:液体12mL×1瓶,4保存;
    试剂四:液体35mL×1瓶,4保存

    粗酶液提取 
    按照组织质量(g:提取液体积(mL)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。15000g 4离心10min,取上清,置冰上待测。

    测定步骤
    1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长到540 nm,蒸馏水调零。
    2、加样表
    试剂名称(μL 对照管 测定管
    95℃水浴5min后灭样本 200  
    粗酶液   200
    试剂一 200  
    试剂二   200
    混匀,37准确保温2h
    试剂三 200 200
    试剂四 600 600
    混匀,95℃水浴5min,于1mL玻璃比色皿540nm读取各管吸光值。ΔA=A测定-A对照。每个测定管需设个一个对照管。

     意:可以在不同对照管中加入不同样品的粗酶液,然后集中进行5min 95℃沸水浴处理。



    DBE活力单位的计算
    标准条件测定回归方程为y = 3.8458x - 0.165x为标准品浓度mg/mLy吸光
    1)按照蛋白浓度计算
    单位的定义:每mg组织蛋白每h催化产生1mg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
    DBE活力(mg /min /mg prot)=[ (ΔA+0.1653.8458×V反总]÷(V×Cpr)÷T
    =0.26× (ΔA+0.165) ÷Cpr
    2)按样本鲜重计算
    单位的定义:每g组织每分钟催化产生1mg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
    DBE活力(mg /min /g鲜重)=[ (ΔA+0.1653.8458×V反总]÷(W× V÷V样总)÷T
    =0.26× (ΔA+0.165) ÷W
    V反总:反应体系总体积,0.4mL V样:加入样本体积,0.2mLV样总:加入提取液体积,1 mLT:反应时间,2 hCpr:样本蛋白质浓度,mg/mLW:样质量,g
    标准曲线线性范围为0.1mg/mL-1mg/mL
    ΔA线性范围为0.01-2
     
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