- ￥1780
- 翌圣生物（Yeasen）
- 12245ES04
- 上海
- 2026年04月27日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
现货
- 英文名：
Hieff NGS® Hyb & Wash Kit
- 保质期：
一年
- 供应商：
翌圣生物科技（上海）股份有限公司
- 保存条件：
-20度
- 规格：
4T
产品简介
Hieff NGS® Hyb & Wash Kit是专门针对翌圣靶向捕获系列产品开发的捕获杂交清洗试剂，搭配新型双链RNA探针（120-mer）将目标DNA捕捉并富集后进行高通量测序，精心优化的一管式杂交缓冲液体系能得到更稳定且更优异的捕获效果。NGS靶保证了实验的稳定性和重复性。
产品信息
| 货号 | 12245ES04 / 12245ES16 / 12245ES96 |
| 规格 | 4 T / 16 T / 96 T |
组分信息
| 组分编号 | 组分名称 | 12245ES04 | 12245ES16 | 12245ES96 | |
| BOX-I |
12245-A | Wash Buffer 1 | 3.2 mL | 12.8 mL | 76.8 mL |
| 12245-B | Wash Buffer 2 | 800 μL | 3.2 mL | 19.2 mL | |
| 12245-C | Wash Buffer 3 | 2.8 mL | 11.2 mL | 67.2 mL | |
| BOX-II |
12245-D | 2 × Hyb Buffer | 72 μL | 290 μL | 1.73 mL |
| 12245-E | RNase Inhibitor | 2 μL | 10 μL | 50 µL | |
| 12245-F | Post PCR Mix | 100 μL | 400 μL | 2.4 mL | |
储存条件
BOX-I：室温保存，有效期1年。
BOX-II：-25~-15℃保存，有效期1年。
注意事项
- 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
- 对于FFPE样本，由于样本降解程度不同，建议不与其他样本类型一起进行捕获。
- 预文库质控：将已准备好的DNA预文库使用Qubit准确测定浓度，并使用1%的琼脂糖电泳或自动化毛细管电泳进行质控评估。文库主峰大约在300-400 bp，预文库总量一般为1-2 µg左右 。
- 需保证所使用PCR管，96孔板或8连管和盖子或膜的密封性以及和PCR仪器的适配性，在第一次实验前必须做密封性检测实验。建议在待测管中加入36 µL Nuclease-free Water，盖严压紧后在热盖模式下65℃过夜，用移液器去除剩余液体，确保体积不低于30 µL，管子和盖子不变形。
- 使用前请核对预文库的接头类型，选择对应的Blockers；如使用的Blockers与预文库接头类型不匹配，将造成捕获文库的中靶率降低、杂交捕获反应失败。
- 杂交和清洗过程中需严格控制温度，如温度控制不准确，可能导致捕获文库的中靶率及均一度降低。
- 磁珠浓缩预文库可能导致GC偏好，推荐使用真空浓缩仪对预文库进行浓缩。
- 在漂洗链霉亲和磁珠后，使用Nuclease-free ddH2O重悬磁珠，切勿丢弃磁珠。
- 本产品仅作科研用途！
使用说明
一、自备材料
1. 配套试剂| 货号 | 名称 | 备注 |
| 13577ES | Hieff NGS® DNA Library Prep Kit | 机械法预文库制备 |
| 12195ES | Hieff NGS® OnePot Pro DNA Library Prep Kit V2 | 酶切法预文库制备 |
| 12244ES | Hieff NGS® Human All Exon Probes | 人全外显子探针 |
| 12246ES | Hieff NGS® Universal Blocking Oligo (with cot-1) | 接头封阻剂 |
| 12247ES | Hieff NGS® Universal Post PCR Primer for Illumina | 扩增引物 |
| 12248ES | Hieff NGS® Hyper Enrichment Beads | 捕获磁珠 |
| 12601ES | Hieff NGS® DNA Selection Beads | 纯化磁珠 |
| 12642ES | 1×dsDNA HS Assay Kit | 测定捕获后终文库浓度 |
- 其他材料
200 μl低吸附PCR管、8连管、96孔板、1.5 ml低吸附Nuclease-free离心管、磁力架；
- 配套仪器
二、操作流程
图1杂交捕获实验流程图
三、操作步骤
1. 样本及探针杂交
1.1 从-20 ℃冰箱取出Hieff NGS® Hyb & Wash Kit Box-II 和 Hieff NGS® Universal Blocking Oligo (with cot-1)，并取出-80 ℃冰箱保存的Probes。 2 × Hyb Buffer放置于65 ℃金属浴中预热。Probes、RNase Inhibitor和Universal Blocking Oligo (with cot-1)放置于冰上融化。其余组分放回冰箱保存。1.2 根据Qubit浓度，将1-6个预文库等量混合到一个新的PCR管, 8连管或96孔板中（建议使用96孔板或8连管做，如果使用单管则需要在杂交过程中的PCR仪上该单管四周放置4个空PCR管进行支撑，避免变形）。具体用量参考表1，确保每个预文库所用的 Index 是唯一的。对于cfDNA、FFPE样本或其他质量较差的样本建议采用1个预文库单独进行杂交捕获，并取全部的文库进入杂交过程。
【注】Qubit 浓度为较精确的检测，浓度定量的误差可能导致测序时数据产量的不均一。
表1 预文库Pooling
| 每个Pool包含的预文库数 | 每个Index文库的量 | Pool的总量 |
| 1 | 750 ng | 750 ng |
| 2 | 500 ng | 1000 ng |
| 3 | 500 ng | 1500 ng |
| 4 | 500 ng | 2000 ng |
| 5 | 500 ng | 2500 ng |
| 6 | 500 ng | 3000 ng |
【注】不能过分干燥，否则会造成DNA溶解困难。若无浓缩干燥仪设备，可以采用附件1的磁珠浓缩富集的替代方案。但会引起文库的少量损失。1.4 取新的1.5 mL离心管或0.2 mL PCR管放置于常温管架上进行杂交混合液的配制。对于全外显子的Panel探针杂交体系配制参考表2。从65 ℃金属浴上取下2 × Hyb Buffer，观察底部确保其澄清透明无沉淀。按照表格中的体积和样本量计算，依次加入其他试剂，然后上下颠倒2次后使用旋涡混匀仪震荡2 s混匀，快速离心5 s将管壁液体离心至管底，配制成单个或多个杂交混合液，放置于常温备用。
【注】2 × Hyb Buffer 比较粘稠，需要缓慢吸取。不要在冰上配制杂交混合液。对于多个杂交建议按照每个组分体积乘以实际杂交反应数再乘以1.2倍配制混合液。
表2 全外显子的Panel探针杂交体系配制
| 名称 | 1次反应体积（µL） | 8次反应体积（µL） | 16次反应体积（µL） |
| Universal Blocking Oligo (with cot-1) | 7.5 | 72 | 144 |
| 2 × Hyb Buffer | 18 | 172.8 | 345.6 |
| RNase Inhibitor | 0.5 | 4.8 | 9.6 |
| Human All Exon Probes |
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