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- xybio
- XY-sh0403
- 上海
- 2026年03月06日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
/
- 保质期：
3个月
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件：
详见说明书
- 规格：
100管/96样
微量法100T/96S
注 意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
磷脂酶C（EC3.1.4.3）是一种水解甘油磷酸酯C3位点甘油磷酸酯键的脂类水解酶，广泛存在于微生物及动植物的组织和细胞中，在细胞代谢、细胞传递、生长发育等方面具有重要作用。
测定原理：
磷脂酶C催化水解NPPC产生对硝-基苯酚，在410nm处有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器：
天平、研钵、超速冷冻离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅。
试剂组成和配制：
提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体102mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体10mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂三：液体8mL×1瓶，4℃保存。
酶液提取：
- 组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于4℃，10000g离心5min，取全部上清于4℃、100000g离心30min，弃上清，取沉淀溶于1mL试剂一。
- 细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后于4℃，10000g离心5min，取全部上清于4℃、100000g离心30min，弃上清，取沉淀溶于1mL试剂一。
- 血清：直接测定。
测定操作：
| 空白管 | 测定管 | |
| 样品（μL） | 20 | |
| 试剂一（μL） | 20 | |
| 试剂二（μL） | 100 | 100 |
| 充分混匀，37℃反应30min | ||
| 试剂三（μL） | 80 | 80 |
| 充分混匀，于微量石英比色皿/96孔板，蒸馏水调零，测定410nm处吸光值，分别记为A空白管和A测定管，△A=A测定管-A空白管。 | ||
酶活计算公式
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：y = 0.0191x - 0.0103，R2 = 0.9991
1．按照蛋白浓度计算
酶活性定义：每毫克蛋白每分钟水解NPPC产生1nmol对硝-基苯酚所需的酶量为一个酶活力单位。
PLC活性（nmol/min/mg prot）=（△A+0.0103）÷ 0.0191×V反总÷(V样×Cpr) ÷T = 17.45×（△A+0.0103）÷ Cpr
2．按照样本质量计算
酶活性定义：每克组织每分钟水解NPPC产生1nmol对硝-反总÷(V样÷V样总×W) ÷T
= 17.45×（△A+0.0103）÷ W
3．按照细胞数量计算
酶活性定义：每104个细胞每分钟水解NPPC产生1nmol对硝-基苯酚所需的酶量为一个酶活力单位。
PLC活性（nmol/min/104 cell）=（△A+0.0103）÷ 0.0191×V反总÷(V样÷V样总×细胞数量) ÷T
= 17.45×（△A+0.0103）÷ 细胞数量
4．按照液体体积计算
酶活性定义：每毫升血清每分钟水解NPPC产生1nmol对硝-基苯酚所需的酶量为一个酶活力单位。
PLC活性（nmol/min/mL）= （△A+0.0103）÷ 0.0191×V反总÷V样÷T
= 17.45×（△A+0.0103）
V反总：反应总体积，0.2mL；V样：加入样本体积，0.02mL；V样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g；T：反应时间，30min
- 用96孔板测定的计算公式如下
1．按照蛋白浓度计算
酶活性定义：每毫克蛋白每分钟水解NPPC产生1nmol对硝-基苯酚所需的酶量为一个酶活力单位。
PLC活性（nmol/min/mg prot）=（△A+0.0103）÷ 0.0095×V反总÷(V样×Cpr) ÷T
= 35.09×（△A+0.0103）÷ Cpr
2．按照样本质量计算
酶活性定义：每克组织每分钟水解NPPC产生1nmol对硝-基苯酚所需的酶量为一个酶活力单位。
PLC活性（nmol/min/g 鲜重）=（△A+0.0103）÷ 0.0095×V反总÷(V样÷V样总×W) ÷T
= 35.09×（△A+0.0103）÷ W
3．按照细胞数量计算
酶活性定义：每104个细胞每分钟水解NPPC产生1nmol对硝-基苯酚所需的酶量为一个酶活力单位。
PLC活性（nmol/min/104 cell）=（△A+0.0103）÷ 0.0095×V反总÷(V样÷V样总×细胞数量) ÷T
=35.09×（△A+0.0103）÷ 细胞数量
4．按照液体体积计算
酶活性定义：每毫升血清每分钟水解NPPC产生1nmol对硝-基苯酚所需的酶量为一个酶活力单位。
PLC活性（nmol/min/mL）= （△A+0.0103）÷ 0.0095×V反总÷V样÷T
= 35.09×（△A+0.0103）
V反总：反应总体积，0.2mL；V样：加入样本体积，0.02mL；V样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g；T：反应时间，30min
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文献和实验网络 二、磷脂酶C PLC是存在于胞浆膜上一个关键酶，有9种异构体，分为α、β、γ和δ四组。PLC作用于PIP2产生三磷酸肌醇（IP3）和二酰基甘油（DAG），IP3和DAG是 T细胞活化的重要信号。除PLCα组外，其余PLC组均不具有跨膜序列，所以PLC在水解PIP2时必须与细胞膜结合。在T细胞活化过程中，参与信号转导的主要为PLCγ
磷脂酰肌醇途径 首先由激活的SrcPrK和ZAP-70通过LAT使膜结合的磷脂酶C(PLC)分子丁链上的酪氨酸残基发生磷酸化。磷酸化的PLC―γ发挥酶活性，使底物二磷酸磷脂酰肌醇(PIP2)水解成两个成分：三磷酸肌醇(1P3)和二酰甘油(DAG)。IP3可迅速地从膜内侧向胞质溶胶中扩散，一方面打开细胞膜上的钙通道使Ca2+ 进入细胞内，同时开启细胞内钙池(内质网)增加Ca2+ ―的释放，协同提高胞内游离钙的浓度。胞质Ca2+ 含量的上升，激活一种称为钙调
G 蛋白结合受体介导的信号途径 G蛋白结合受体属于七次跨膜受体家族，主要的配体为趋化因子。此类受体与三聚体G蛋白连接。G蛋白有三个亚单位：。、p和Yo受体与配体结合后，引起异源三聚体G蛋白构型改变并发生解离，形成的Ga-GTP复合体和GpY分别介导相应信号转导途径，产生效应功能。受G蛋白调控的最为重要的酶有腺苷酸环化酶和磷脂酶C(PLC)家族成员。 趋化因子受体介导的信号转导 趋化因子受体属七次跨膜受体家族，七个跨膜片段由长短不一的肽
