- ￥4440 - 25920
- 抚生
- A-01K100114
- 国产
- 2025年07月10日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
59
- 英文名：
Recombinant Mouse Dihydrofolate reductase DHFR
- 保质期：
说明书
- 供应商：
上海抚生
- 保存条件：
-20°C for 12 months as lyophilized; 2-8°C for 1 month under sterile conditions after reconstitution
- 规格：
50μg/200μg/1mg
| 规格： | 50μg | 产品价格： | ￥4440.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 200μg | 产品价格： | ￥8100.0 |
| 规格： | 1mg | 产品价格： | ￥25920.0 |
商品详情：
| 产品名称 | Recombinant Mouse Dihydrofolate reductase DHFR |
| 货号 | A-01K100114 |
| 规格 | 50μg, 200μg, 1mg |
| 种属 | Mouse |
| 宿主 | E.Coli |
| 表达区间 | 1-187 |
| 分子量 | 20.5 kDa |
| 标签 | N-terminal His Tag |
| 纯度 | Greater than 95% as determined by SDS-PAGE |
| 应用 | Western Blot, ELISA |
| 性状 | Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution in 10 mM Hepes, 500 mM NaCl with 5% trehalose, pH7.4 |
| 溶解方法 | Centrifuge the vial at 10,000 rpm for 1 minute, reconstitute at 200 μg/ml in sterile distilled water by gentle pipetting 2-3 times, don’t vortex |
| 存储 | -20°C for 12 months as lyophilized; 2-8°C for 1 month under sterile conditions after reconstitution |
| 别名 | DHFR, DHFRP1, Dihydrofolate reductase, DYR, DYR_HUMAN, EC 1.5.1.3 |
1. 分装量的多少取决于每次试验的使用量。分装量不少于 10μl；分装量越少，由于蒸发和吸附于管内壁而引起的损失会越大。
2. 避免使用无霜冰箱来保存重组蛋白。
3. 解冻后的分装重组蛋白应保存于 4℃，一般可以保存1-2周。
4. 稀释至工作浓度的重组蛋白最好不要在 4℃保存超过一天时间。
5. 冷冻保存的蛋白溶液，在使用之前应室温解冻，确认充分溶解，没有结块后使用。
6. 取用溶液时避免反复多次吹打蛋白溶液，以免引起不必要的活性损失。
操作步骤：
（一）获得目的基因
1、通过PCR方法：以含目的基因的克隆质粒为模板，按基因序列设计一对引物（在上游和下游引物分别引入不同的酶切位点），PCR循环获得所需基因片段。
2、通过RT-PCR方法：用TRIzol法从细胞或组织中提取总RNA，以mRNA为模板，逆转录形成cDNA第一链，以逆转录产物为模板进行PCR循环获得产物。
3、人工合成法：依照检索到的目的基因序列，设计合成相互重叠的单链寡核苷酸，再通过重叠延伸PCR法拼接出全长，这种方法无需模板，是目前常用的获取基因的手段之一。
（二）构建重组表达载体
1、载体酶切：将表达质粒用限制性内切酶（同引物的酶切位点）进行双酶切，酶切产物行琼脂糖电泳后，用胶回收Kit或冻融法回收载体大片段。
2、PCR产物双酶切后回收，在T4DNA连接酶作用下连接入载体。
（三）获得含重组表达质粒的表达菌种
1、将连接产物转化大肠杆菌，根据重组载体的标志（抗Amp或蓝白斑）作筛选，挑取单斑，碱裂解法小量抽提质粒，双酶切初步鉴定。
2、测序验证目的基因的插入方向及阅读框架均正确，进入下步操作。否则应筛选更多克隆，重复亚克隆或亚克隆至不同酶切位点。
3、以此重组质粒DNA转化表达宿主菌的感受态细胞。
（四）诱导表达
1、挑取含重组质粒的菌体单斑至2ml LB（含Amp50μg/ml）中37℃过夜培养。
2、按1∶50比例稀释过夜菌，一般将1ml菌加入到含50mlLB培养基的300ml培养瓶中，37℃震荡培养至OD600 ≌0.4-1.0（最好0.6，大约需3hr）。
3、取部分液体作为未诱导的对照组，余下的加入IPTG诱导剂至终浓度0.4mM作为实验组，两组继续37℃震荡培养3hr。
4、分别取菌体1ml，离心12000g×30s收获沉淀，用100μl 1%SDS重悬，混匀，70℃10min。
5、离心12000g×1min，取上清作为样品，可做SDS-PAGE等分析。
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