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- xybio
- XY-sh0197
- 上海
- 2025年07月24日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
/
- 保质期：
3个月
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件：
详见说明书
- 规格：
100管/96样
微量法100管/96样
注 意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
NO（Nitric Oxide，NO）广泛分布于生物体内神经、循环、呼吸、消化、泌尿生殖等系统中，特别是神经组织中较丰富。它作为细胞间及细胞内的信息物质，发挥信号传递的作用，是一种新型的生物信使分子，在机体的生理、病理过程中起着重要的作用。
测定原理：
NO在体内或水溶液中极易氧化生成NO2—，在酸性条件下，NO2—与重氮盐磺酸胺生成重氮化合物，进一步与萘基乙烯基二胺偶合，产物在550nm处有特征吸收峰，测定其吸光值，可以计算NO含量。
自备实验用品及仪器：
天平、研钵或匀浆器、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体6mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂二：液体6mL×1瓶，4℃避光保存。(用之前60℃加热震荡15min)
样品处理：
- 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆。10000g，4℃离心15min，取上清，置冰上待测。
- 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000g，4℃，离心15min，取上清置于冰上待测。
- 体液和培养液等其它液态样品：直接测定。
测定步骤和操作表：
- 分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至550nm。
- 操作表
| 空白管 | 测定管 | |
| 样品（μL） | 100 | |
| 提取液（μL） | 100 | |
| 试剂一（μL） | 50 | 50 |
| 试剂二（μL） | 50 | 50 |
| 混匀，室温静置15min，于微量石英比色皿/96孔板，测定A550，ΔA=A测定-A空白 | ||
NO含量计算：
- 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、组织样品：
（1）按样本质量计算
NO含量（μmoL/g 鲜重）=（ΔA +0.0103）÷0.016×V反总÷（V样÷V样总×W）×10-3
= 0.125×（ΔA +0.0103）÷W
（2）按样本蛋白浓度计算
NO含量（μmoL/mg prot）=（ΔA +0.0103）÷0.016×V反总÷（V样×Cpr）×10-3
= 0.125×（ΔA +0.0103）÷Cpr
2、细胞：
NO含量（μmol/104 cell）=（ΔA +0.0103）÷0.016×V反总÷（V样÷V样总×细胞数量）×10-3
= 0.125×（ΔA +0.0103）÷细胞数量（万个）
3、其他样品：
NO含量（μmoL/L）=（ΔA +0.0103）÷0.016×V反总÷V样
= 125×（ΔA +0.0103）
V反总：反应总体积，0.2mL；V样：反应中样品体积，0.1mL；V样总：加入提取液体积，1mL；W：样品质量，g；Cpr：蛋白浓度，mg/mL
- 用96孔板测定的计算公式如下
1、组织样品：
（1）按样本重量计算
NO含量（μmoL/g 鲜重）=（ΔA +0.0103）÷0.008×V反总÷（V样÷V样总×W）×10-3
= 0.25×（ΔA +0.0103）÷W
（2）按样本蛋白浓度计算
NO含量（μmoL/mg prot）=（ΔA +0.0103）÷0.008×V反总÷（V样×Cpr）×10-3
= 0.25×（ΔA +0.0103）÷ Cpr
2、细胞：
NO含量（μmol/104 cell）=（ΔA +0.0103）÷0.008×V反总÷（V样÷V样总×细胞数量）×10-3
= 0.25×（ΔA +0.0103）÷细胞数量（万个）
- 其他样品：
V反总：反应总体积，0.2mL；V样：反应中样品体积，0.1mL；V样总：加入提取液体积，1mL；W：样品质量，g；Cpr：蛋白浓度，mg/mL
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文献和实验细胞亚铁含量增多是铁死亡区别其他细胞死亡方式的一个主要特征，其检测也是铁死亡研究最常见的指标之一。根据市场热点反馈，Elabscience®加大研发、优化力度，专门推出了针对细胞样本的高灵敏度亚铁离子比色法测试盒 下面整理了一些关于细胞亚铁检测的常见问题，助力大家更顺利地完成实验。 Q1：检测细胞亚铁需要多少细胞？ 本试剂盒每个样本需准备大约106个细胞。相比以往的亚铁离子比色法测试盒，样本需求数量大大减少。 Q2：细胞样本如何进行破碎处理？ 本试剂盒使用细胞裂解液对细胞样本进行处理
质的结合。所现颜色至少在l小时内是稳定的。 (三)与改良Lowry氏法相比，干扰物质较少。 (四)当样品中存在较大量的十二烷磺酸钠(SDS)、TritonX-100等去垢剂时，显色反应会受到干扰。如样品缓冲液呈强碱性时也会影响显色，故必须预先处理样品。 (五)考马斯亮兰G250染液不宜久存，以1-2月为宜。 (六)微量法测定蛋白含量范围为1-10μg；常量法测以检测范围10-100／μg为宜。 【器材】 (一)试管l
曲线。由此标准曲线，根据测出的未知样品的A595值，即可查出未知样品的蛋白质含量。0.5mg牛血清蛋白/ml溶液的A595约为0.50。2.微量法当样品中蛋白质浓度较稀时(10-100mg/ml)，可将取样量(包括补加的水)加大到0.5ml或1.0ml，空白对照则分别为0.5ml或1.0ml H2O，考马斯亮蓝G-250试剂仍加5.0ml，同时作相应的标准曲线，测定595nm的光吸收值。0.05mg牛血清蛋白/ml溶液的A595约为0.29。
