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- xybio
- XY-sh0111
- 上海
- 2026年01月06日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
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- 英文名：
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- 保质期：
3个月
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件：
详见说明书
- 规格：
50管/48样
分光光度法50管/48样
注 意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
POD（EC 1.11.1.7）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，可催化过氧化氢氧化酚类和胺类化合物，具有消除过氧化氢和酚类、胺类毒性的双重作用。
测定原理：
POD催化H2O2氧化特定底物，在470nm有特征光吸收。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水
试剂的组成：
提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：液体50mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：液体100μL×1支，4℃保存；
试剂三：液体100μL×1支，4℃保存。
粗酶液提取：
1、细菌、细胞或组织样品的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤和加样表：
- 分光光度计预热30min以上，调节波长至470nm，蒸馏水调零。
- 工作液的配制：临用前将试剂一、试剂二、试剂三按照2.6（mL）：1.5（μL）：1（μL）的比例混匀；在37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）预热10min以上；现配现用。
- 在1mL玻璃比色皿中加入50μL样本和950μL工作液，混匀，记录470nm下1min时吸光值A1和2min后的吸光值A2。计算ΔA＝A2-A1。
注意：
如果ΔA小于0.005，可将反应时间延长到5min。如果ΔA大于0.5，可将样本用提取液稀释后测定，计算公
式中乘以相应稀释倍数。
POD活性计算：
1、血清（浆）POD活性
单位定义：每mL血清（浆）在每mL反应体系中每分钟A470变化0.01为一个酶活力单位。
计算公式：
POD（U/mL）=ΔA×V反总÷V样÷0.01÷T =2000×ΔA
2、组织、细菌或细胞POD活性
(1) 按样本蛋白浓度计算
单位定义：每mg组织蛋白在每mL反应体系中每分钟A470变化0.01为一个酶活力单位。
POD（U/mg prot）＝ΔA×V反总÷（V样×Cpr）÷0.01÷T =2000×ΔA÷Cpr
（2）按样本鲜重计算
单位定义：每g组织在每mL反应体系中每分钟A470变化0.01为一个酶活力单位。
POD（U/g 鲜重）＝ΔA×V反总÷(W× V样÷V样总)÷0.01÷T =2000×ΔA÷W
（3）按细菌或细胞密度计算
单位定义：每1万个细菌或细胞在每mL反应体系中每分钟A470变化0.01为一个酶活力单位。
POD（U/104 cell）＝ΔA×V反总÷(500×V样÷V样总)÷0.01÷T =4×ΔA
V反总：反应体系总体积，1mL； V样：加入样本体积，0.05mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，1 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量；500：细菌或细胞总数，500万。
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文献和实验一、TUNEL法的实验原理 细胞发生凋亡时, 染色体DNA双链或单链断裂产生大量的粘性3'-OH末端，可在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT)的作用下，将脱氧核糖核苷酸和荧光素、过氧化物酶、碱性磷酸酶或生物素形成的衍生物标记到DNA的3'-末端，从而可进行凋亡细胞的检测，这类方法称为脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(terminal -deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling, TUNEL)。由于正常的或正在增殖
度高，主要缺点是试剂腐蚀性大，邻甲苯胺被怀疑有致癌性，既有碍于健康又易损坏仪器。以上非酶法均为非特异性方法，由于非糖还原物质，如谷胱甘肽，维生素C、肌酸、肌酐、尿酸等也都能参与反应，可使结果比酶法偏高0.3～0.6mmol／L.3.酶法：包括葡萄糖氧化酶-过氧化物酶（GOD-POD）偶联法、己糖激酶（HK）法和葡萄糖氧化酶-氧速率（GOD-OR）法。酶法采用特定的酶促生化反应步骤，因此具有特异性高。（1）葡萄糖氧化酶-过氧化物酶偶联法（GOD-POD法）：目前应用最广泛的常规方法。医学教育网|搜索整理
用了许多方法检测小鼠的肝脏、脑部、睾丸等组织的细胞凋亡，其中 TUNEL 法做的最多，我购买的试剂盒主要是 roche、 promega 公司，结果大多数成功，偶尔也有失败，下面我把实验中的关键问题与大家共享一下，同时也希望能对初学者有所帮忙。 TUNEL 法的实验原理 基本原理：对不同组织切片先增加细胞膜通透性，然后让 rTDT 和生物标记的 dTUTP 进入细胞内，在 rTDT 的辅助下 dTUTP 与核断裂的 DNA 3』-OH 结合，再用 HRP 标记的链霉
