本试剂盒仅供科研使用
黄嘌呤氧化酶(xanthione oxidase, XOD)试剂盒说明书
(货号:WS9310F 分光法 48 样)
一、产品简介:
黄嘌呤氧化酶(XOD,EC 1.17.3.2)属需氧脱氢酶类,是活性氧主要来源之一,也是
核苷酸代谢的关键酶之一。XOD 主要分布于哺乳动物的肝脏等组织中,当肝功能受损时,
XOD 大量释放到血清中,对肝损害的诊断具有特异性的意义。
黄嘌呤氧化酶(XOD)催化黄嘌呤氧化生成尿酸和超氧阴离子自由基,接着与显色剂反
应生成有色物质,通过检测有色物质的生成量多少即可计算得出 XOD 酶活性大小。
二、试剂盒组分与配制:
试剂名称
规格
保存条件
备注
提取液
液体 60mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
粉体 mg×1 支
-20℃保存
用前甩几下使粉剂落入底部,再加
1.6mL 蒸馏水溶解备用。
试剂二
液体 40mL×1 支
4℃保存
试剂三
粉体 mg×5 支
4℃保存
临用前甩几下,使粉剂落到底部,
每支加 0.1mL 试剂四振荡或超声
溶解后,再加 3.9mL 蒸馏水混匀使
用(务必加 0.1mL 试剂四溶解后
再加水),一周内用完。
试剂四
液体×1 支
4℃保存
三、所需的仪器和用品:
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、低温离心机、可调式移液器、研钵、
冰和蒸馏水。
四、黄嘌呤氧化酶(XOD)的测定:
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验
样本和试剂浪费!
1、样本制备
① 组织样本:
取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液,在 4ºC 或冰浴进行匀浆(或使用各类常见匀浆器)。
4ºC×12000rpm 离心 10min,取上清作为待测液。
【注】:若增加样本量,可按照组织质量(
g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例进行提取
② 液体样本:直接检测;若浑浊,离心后取上清检测。
2、上机检测
① 可见分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 450nm,蒸馏水调零。
② 测定前将试剂一、二和三 25℃水浴 5min 以上。
③ 试剂三每次加样前务必混匀,保证试剂的均一性。
④ 在 EP 管中依次加入:
试剂名称(
μL)
测定管
样本
60
试剂一
30
试剂二
320本试剂盒仅供科研使用
2
试剂三
320
37℃避光孵育,立即于 450nm 读取吸光值
A1,30min 后读取 A2,ΔA=A2-A1。
【注】:若ΔA 在零附近徘徊,可延长反应时间 T(如增至 60min)或加大样本量 V1(如增加至 100μL,
则试剂二相应减少),则改变后的反应时间 T 和样本量 V1 需代入计算公式重新计算。
五、结果计算:
1. 按样本鲜重计算:
酶活定义:37℃下每克组织样本每分钟催化产生 1nmol 有色物质为一个酶活单位(U)。
XOD 活性(U/g 鲜重)=(△A÷ε÷d×V2×109)÷(W×V1÷V)÷T=13.1×△A÷W
2. 按样本蛋白浓度计算:
酶活定义:37℃下每毫克蛋白样本每分钟催化产生1nmol有色物质为一个酶活单位(U)。
XOD 活性(U/mg prot)=(△A÷ε÷d×V2×109)÷(V1×Cpr)=13.1×△A÷Cpr
3. 按液体体积计算:
酶活定义:37℃下每毫升样本每分钟催化产生 1nmol 有色物质为一个酶活单位(U)。
XOD 活性(U/mL)=(△A÷ε÷d×V2×109)÷V1×D=13.1×△A
V---提取液体积,1 mL;
V1---加入反应体系中样本体积,0.06ml;
d---光径,1cm;
V2---反应体系总体积,730μL =7.3×10-4L;
ε---甲臜物质的摩尔消光系数,3.1×104 L /mol/cm;
T---反应时间,30min;
W---样本质量,g;
Cpr---样本蛋白质浓度,mg/mL ;建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒。