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- WS1780F
- 国内
- 2025年12月24日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
Fructokinase (FK) Kit
- CAS号：
WS1780F
- 保质期：
3个月
- 供应商：
上海瓦兰生物
- 保存条件：
4℃
- 规格：
48T
本试剂盒仅供科研使用
果糖激酶（Fructokinase，FK）试剂盒说明书
(货号：WS1780F 紫外分光法 48 样)
一、产品简介：
果糖激酶（FK，EC 2.7.1.4）能调节蔗糖与淀粉之间的相互转化，参与调控植物的代
谢和生长发育。
果糖激酶（FK）磷酸化果糖生成 6-磷酸果糖，该产物进一步在复合酶的相继作用下，
还原 NADP 生成 NADPH，通过检测 NADPH 在 340nm 处光吸收增加速率，得出果糖激
酶的酶活性大小。
二、试剂盒的组成和配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 60mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
液体 40mL×1 瓶
4℃保存
试剂二
粉剂 mg×1 支
-20℃保存 用前甩几下使试剂落入底部，再
加 1.7mL 的蒸馏水溶解备用。
试剂三
液体μL×1 支
-20℃保存 用前甩几下使试剂落入底部，再 加
1.7mL 的蒸馏水溶解备用。
试剂四
粉剂 mg×1 瓶
4℃保存
用前甩几下使试剂落入底部，再
加 34mL 的试剂一溶解备用。
试剂五
粉剂 mg×1 支
4℃保存
用前甩几下使试剂落入底部，再
加 1.7mL 的蒸馏水溶解备用。
三、所需的仪器和用品：
紫外分光光度计、1mL 石英比色皿（光径 1cm）、恒温水浴锅、台式离心机、可调
式移液器、研钵、冰和蒸馏水。
四、果糖激酶(FK)活性测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织样本：
称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆。12000rpm，4℃离心 10min，取
上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可以按照组织质量（
g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例提取。
② 细菌/细胞样本：
先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取
液；冰浴超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复
30 次）；12000rpm，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比
例进行提取。
③ 液体样本：直接检测。若浑浊，离心后取上清检测。
2、上机检测：
① 紫外分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。
② 所有试剂解冻至室温（25℃）。
③ 在 1mL 石英比色皿中依次加入：本试剂盒仅供科研使用
2
试剂名称（μL）
测定管
样本
70
试剂二
30
试剂三
30
试剂四
580
混匀，37℃孵育 5min
试剂五
30
混匀，立即于 340nm 处读取吸光值 A1，
15min 后读取 A2，△A=A2-A1。
【注】1.若△A 的值在零附近，可以适当延长反应时间到 30min 或更长读取 A2；或适当加
大样本量 V1，则试剂四相应减少，则改变后的反应时间 T 加样体积 V1 需代入计
算公式重新计算。
2. 若起始值 A1 太大如超过 2（如颜色较深的植物叶片，一般色素较高，则起始值
相对会偏高），可以适当减少样本加样量 V1，则试剂四相应增加，则改变后的
V1 需代入计算公式重新计算。
或向待测样本中加少许活性炭混匀静置 5min 后 12000rpm, 4℃离心 10min，上清
液用于检测；
3. 若上升趋势不稳定，可以每隔 10S 读取一次吸光值，选取一段线性上升的时间段
来参与计算，相对应的 A 值也代入计算公式重新计算。
五、结果计算：
1、按样本蛋白浓度计算
单位定义：每毫克组织蛋白每分钟生成 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。
果糖激酶(FK)（nmol/min/mg prot）＝[ΔA÷（ε×d）×V2×109]÷(V1×Cpr) ÷T=113.3×ΔA÷Cpr
2、按样本鲜重计算
单位定义：每 g 组织每分钟生成 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。
果糖激酶(FK)（nmol/min/g 鲜重）＝[ΔA÷（ε×d）×V2×109]÷(W× V1÷V) ÷T=113.3×ΔA÷W
3、按细菌或细胞密度计算
单位定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟生成 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。
果糖激酶(FK)（nmol/min/104 cell）＝[ΔA÷（ε×d）×V2×109]÷(500×V1÷V)÷T=0.227×ΔA
4、按液体体积计算
单位定义：每毫升液体每分钟生成 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。
果糖激酶(FK)（nmol/min/mL）＝[ΔA÷（ε×d）×V2×109]÷V1÷T=113.3×ΔA
ε----NADPH 摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm； d----1mL 石英比色皿，1cm；
V----加入提取液体积，1 mL；
V1----加入样本体积，0.07mL；
V2----反应体系总体积，7.4×10-4 L；
T----反应时间，15min；
W----样本质量，g；
500---细菌或细胞总数，500 万；
Cpr----样本蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
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文献和实验相关实验
人他克莫司（FK506 ） 酶联免疫分析 试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中他克莫司（FK506 ） 的含量。 实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人他克莫司（ FK506 ） 水平。用纯化的人他克莫司（ FK506 ） 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入他克莫司（ FK506 ）， 再与 HRP 标记的 FK
。他们引入的是硝酸纤维素膜，获得了远远优于塑料板的结果。1995年，荷兰Utrecht大学免疫研究所的Schielen P团队（该团队后来挂靠Utrecht大学，创办了荷兰U-Cytech公司，成为世界上顶级的ELISPOT试剂盒生产商之一）把一种更优于硝酸纤维素膜的PVDF膜也被引入了ELISPOT检测中（Schielen P et. al., 1995）。做过Westernblot的人都知道，PVDF膜比硝酸纤维素膜有更优的蛋白吸附性质，更加精细的显色条带分辨率。因此，PVDF的引入是继硝酸
果糖激酶(FK)试剂盒
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