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- XY-sj302
- 上海
- 2025年07月11日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
60
- 英文名：
/
- 保质期：
3个月
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件：
详见说明书
- 规格：
100管/96样
微量法 100T/96S
注 意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
L-半乳糖途径是合成AsA的主要途径。Gal LDH位于线粒体内膜，负责催化植物体内AsA生物合成的最后一步，也是该途径的关键酶之一，对植物体内AsA含量的积累起着至关重要的作用。
测定原理：
Gal LDH催化L-半乳糖内酯还原细胞色素C(Cyt c)，还原型Cyt c在550nm有吸收峰；测定还原型Cyt c增加速率，来计算Gal LDH活性。
自备仪器和用品：
台式离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：液体100mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1瓶（棕色），4℃保存。临用前加入16mL蒸馏水，充分溶解。
试剂三：粉剂×1管，4℃保存。临用前加入2mL蒸馏水，充分溶解。
粗酶液提取：
照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。13000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。
Gal LDH测定操作：
1. 分光光度计/酶标仪预热30 min，调节波长到550nm，蒸馏水调零。
2. 试剂二在25℃水浴锅中预热30 min。
3.依次在、微量玻璃比色皿/96孔板中加入20μL上清液、160μL预热的试剂二和20μL试剂三，迅速混匀后于550nm比色，记录10s和130s的吸光值A1和A2，△A = A2﹣A1。
Gal LDH活性计算公式：
使用96孔板测定的计算公式如下
(1). 按蛋白浓度计算
Gal LDH活性单位定义：25℃中每毫克蛋白每分钟还原1nmol Cyt c 为1个酶活单位。
Gal LDH (nmol/min/mg prot) = △A÷ε÷d×V反总×109÷（Cpr×V样）÷T
=578×△A ÷Cpr
(2). 按样本质量计算
Gal LDH活性单位定义：25℃中每克样品每分钟还原1nmol Cyt c 为1个酶活单位。
Gal LDH (nmol/min/g 鲜重) = △A÷ε÷d×V反总×109÷（W×V样÷V样总）÷T
=578×△A ÷W
ε：还原型Cyt c摩尔消光系数，17.3×103L/ mol/cm；d：96孔板光径(cm)，0.5cm；V反总：反应体系总体积，0.2mL=0.0002 L；109：1mol=1×109nmol；V样：加入反应体系中上清液体积，20μL=0.02mL；V样总：提取液体积，1 mL；Cpr：上清液蛋白浓度，mg/mL，蛋白质浓度需要另外测定，建议使用本公司蛋白质含量BCA试剂盒；T：反应时间，2min。
注意事项:
试剂二和试剂三配制好后3天内使用完。
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文献和实验大鼠 乳酸脱氢酶（LDH ） 酶联免疫分析 试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定大鼠血清，血浆及相关液体样本中 乳酸脱氢酶（ LDH ） 的含量。 实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中 大鼠 乳酸脱氢酶（ LDH ） 水平。用纯化的 大鼠 乳酸脱氢酶（ LDH ） 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入 乳酸脱氢酶（ LDH ） ，再与 HRP 标记
一、目的： 1.学习琼脂糖聚胶电泳的原理和方法；2.学习酶专一性染色原理及其应用；3.掌握分离LDH同工酶的方法；4.学习测定血清LDH总活力的原理与方法。二、原理： 能催化同一反应而蛋白质结构不同的酶，称为同工酶。同工酶的蛋白结构既然有差别，它们的理化性质也就有所差异。因此可用电泳或其他方法将它们分离开来。例如乳酸脱氢酶（LDH）同工酶，它们都能催化乳酸脱氢产生丙酮酸，但经电泳法分离后，就有5个同工酶区带。由于同工酶在不同组织、器官中的分布不同，即具有组织器官特异性。因此已利用同工酶的酶谱作
苯酯-3-p-氯化硝基苯四唑，20μl反应液（含0.03％ BSA，2.7U/ml硫辛酰胺脱氢酶，4.5mmol/L氢化型辅酶I（NAD＋），1.2％蔗糖的PBS），室温中放置20分钟。 6．在酶联检测仪上测定各孔的光密度（OD值），检测波长492nm，参考波长650nm。 2）特异性杀伤活性的计算 杀伤活性（％）＝[（OD实验组－OD总自然释放）/（OD最大释放组－OD总自然释放）]×100％
